文档介绍：第 38卷分析化学( FENX IHUAXU E) 研究简报第 2期
2010年 2月 Ch inese Journa l o f A na ly tica l Chem istry 263~ 266
DOI: 10. 3724 /SP. J. 1096. 2010. 00263
含不同基团的聚丙烯酰胺改性毛细管柱的制备及应用
杨春王双寿常春燕王洋胡效亚*
(扬州大学化学化工学院, 扬州 225002)
摘要在丙烯酰胺、N, N-亚甲基双丙烯酰胺的混合溶液添加烯丙基胺或乙烯基磺酸钠, 得到混合单体溶
液, 引入毛细管中, 经热自由基引发原位聚合并键合到管壁上, 制得化学改性的毛细管柱。通过调节烯丙基
胺、乙烯基磺酸钠的加入量, 得到荷电不同的聚合物。共制备了 5根改性柱, 发现带有氨基的聚合物涂层优于
磺酸基及中性聚合物涂层。进一步比较 3根氨基柱的分离效果, 单体混合液中含有 0. 15 m o l/L 丙烯酰胺、
01 03 m o l/L N, N -亚甲基双丙烯酰胺及> 1 m ol/L 的烯丙基胺时, 制得的改性柱效果最好, 可以方便地调节电
渗流, 并能有效抑制蛋白质的吸附, 用其对鸡卵清蛋白进行区带电泳, 显示出良好的分离度及重现性。
关键词毛细管电泳; 聚合物改性柱; 电渗流; 蛋白质
1 引言
蛋白质、核酸、葡萄糖、氨基酸等许多生物大分子的分离分析是毛细管电泳( CE )应用的重要组成部
分[ 1] 。在蛋白质的毛细管电泳分离中, 由于疏水作用[ 2] 、静电作用及其它因素[ 3~ 6] 的存在, 使得样品在
毛细管内壁上产生吸附, 导致严重的峰形拖尾、柱效低、重现性变差等问题, 甚至样品滞留在管内不出
峰。解决此问题通常有以下几种方法[ 3, 7] : 极端 pH 值法(缓冲液的 pH 8~ 11或 pH < 2); 缓冲液中加入
小分子添加剂(如: 季铵盐、阳离子表面活性剂、二胺类等); 毛细管内壁的改性, 通过物理涂布或化学键
合的方法制备改性柱。前两种方法只能一定程度地减少吸附; pH 过高或过低会引起蛋白质变性; 添
加剂浓度过大也可导致蛋白质变性; 电解质浓度过高还会导致电流增大, 对分离效果都会产生负面影
响。因此化学键合改性成为毛细管柱等分离通道处理最常用的方法[ 8] 。此外, 电渗流( EOF)的大小及
方向对分离效果影响较大, 需要选择合适的电渗流[ 9] 。
本研究采用化学键合法制备改性柱以减轻蛋白质的吸附, 通过改变酸、碱性单体的组成调节聚合物
的带电状态, 从而有效调节电渗流, 使之满足分离的需要。
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂
DZF-6020恒温干燥箱(上海精宏实验设备有限公司); 电子天平(北京赛多利斯天平有限公司);
P /ACE MDQ 高效毛细管电泳仪(美国 B eckm an公司), 配紫外检测器、P /ACE 数据采集工作站。 1 mL
微量注射器。
烯丙基胺、乙烯基磺酸钠、丙烯酰胺(单体)、N, N-亚甲基双丙烯酰胺(交联剂)、3-甲基丙烯酰氧丙
基三甲氧基硅烷( C-MAPS, 98%, 山东鹏浩化工)。其它试剂均为分析纯。一次去离子水。毛细管
( 75 Lm .i d.