文档介绍：22《动物细胞工程》课件
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，并且产生这些抗体的B细胞可与骨髓瘤细胞融合，产生制造人mAb的杂交瘤。
因为B淋巴细胞具有分泌特异性抗体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下大量增殖的本领，所以由某种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞，能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。
细胞融合技术、细胞培养技术。
第一次筛选得到杂交瘤细胞，第二次筛选先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞下培养筛选出特异抗体的细胞群。
动物细胞培养液的主要成分：
葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。
与植物培养基相比其特点是：
（1）液体培养基
（2）含有动物血清
动物体细胞大都生活在液体的环境
保证细胞顺利的生长增殖
动物细胞培养
胚胎或幼龄动物的组织器官
细胞悬浮液
10代细胞
50细胞
无限传代
剪碎
胰蛋白酶
洗涤、稀释、分离
原代培养
用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。—，此环境下胃蛋白酶（）没有活性，而胰蛋白酶(-)的活性较高。
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。
动物细胞培养不能最终培养成生物体
传代培养
细胞株
细胞系
动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。
细胞悬浮液
10代细胞
50代细胞
无限传代
原代培养
传代培养
细胞株
细胞系
如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？
多数组织细胞固定在表面生长和分裂。
随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖
遗传物质改变
动物细胞培养技术的应用
（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。
（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。
（3）用于检测有毒物质
（4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据
这只老鼠身上的“人耳”是由我国科学家曹谊林教授利用细胞工程技术复制出来的。
拓展：聚乙二醇处理后，培养液中存在哪几种细胞？
脾-脾脾-瘤瘤-瘤
未融合的脾细胞
未融合的瘤细胞
已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断，人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂交瘤细胞，请回答：（1）试管中除融合的杂交瘤细胞外，还有_____________种融合细胞。（2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂交瘤细胞，并说明原理。　　方法：
原理：
试试身手
解析：　　（1）试管中有人的淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞，在促溶剂的作用下，可能出现以下3种细胞的融合情况，人的淋巴细胞和淋巴细胞融合，小鼠的骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合，人的淋巴细胞和小鼠的骨髓瘤细胞融合，实验需要的是第3种细胞，即杂交瘤细胞；　　（2）要将杂交瘤细胞分离出来，可以在培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞；加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞中可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。
变式训练
生产单克隆抗体时，要在培养液中加入某种试剂才能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂
A．能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNA复制
B．能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活
C．选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制
D．能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成
（3）将分离出的杂种细胞在不同的条件下继续培养，获得A、B、C三细胞株，各细胞株内含有的人染色体如下表所示（“＋”有，“－”无）
细胞株
人染色体编号
1
2
3
4
5
6
7
8
A株
＋
＋
＋
＋
－
－
－
－
B株
＋
＋
－
－
＋
＋
－
－
C株
＋
－
＋
－
＋
－
＋
－
测定各细胞株内人体所具有的5种酶的活性，结果是：①B株有a酶活性；②A、B、C株均有b酶活性；③A、B株有c酶活性；④c株有d酶活性；⑤A、B、C株