文档介绍：7免疫组化结果分析和判断
(一）对照染色的目的
设对照的目的是为了排除假阴性和假阳性。假阴性的原因主要有三：①组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽；②抗体失活、效价过低或稀释度不合适（主要指一抗，即特异性抗体）；③染色步骤遗实验片同步进行染色；③对照的结果应附合要求。
⒋自身对照是指在同一标记切片上的自身组织成分的阴性背景对照。即与靶抗原阳性反应细胞或成分相邻的阴性背景结构的显色，结果应为阴性或着色较浅，需与阳性着色成分呈鲜明对比。目的在于排除内源性干扰产生的假阳性和因抗原弥散移位造成的错误结果。
第三节
非特异染色
非特异染色是指免疫组化染色过程中产生的非靶抗原的呈色结果，属假阳性，又称背景着色，能严重干扰免疫组化染色结果的正确判断，应竭力避免或减轻。其原因涉及免疫组化染色流程的各个环节，可来自：
①内源性干扰(自发荧光、内源酶、内源性生物素等)；②试剂污染(质量差，交叉反应，Fc受体干扰等)；③组织处理不当(组织固定不及时或固定不良所导致的抗原弥散移位、洗涤不充分所导致的游离试剂残留等)。
纠正的方法视原因而异，可在预实验基础上，采用有针对性的纠正对策，即对症下药(具体纠正方法不展开讲了，同学们可以自己阅读讲义p123-126) 。
第四节
阳性标记的形态特征和判断
免疫组化标记具有一定形态特点，若能熟练掌握则有助于对免疫组化标记结果的正确判断。特点包括定性、定位和定量三方面。
免疫显色强度和阳性细胞密度是定性定量指标，实际工作中常采用强度和密度结合的方法综合计量，与抗原含量有关；阳性细胞的着色形态及组织分布特点主要是定位指标，与功能有关。
一、阳性标记免疫特征：分"弱(+)、中(++)、强(+++)"三级。免疫荧光法（FITC为例）则表现为浅绿色荧光、明显绿色荧光和亮绿色耀眼荧光；
免疫酶标记（HRP- DAB/H2O2）则表现为淡黄色细颗粒、棕黄色颗粒和褐黄色粗颗粒，后者耀眼易见。一般图片照像，原则上多取强阳性区域。
二、阳性标记细胞学特征（以HRP-DAB/H2O2为例）可分为①胞膜型；②胞核型；③胞质(浆)型；④微绒毛型和⑤复合型（胞膜-胞质兼有，胞核-胞质兼有，或微绒毛-胞质兼有）等五种阳性细胞类型。这与抗原所在部位相关联，但应注意排除因组织固定不好引起的抗原弥散假象，尤其是复合型图像。
三、阳性标记组织学特征（以HRP-DAB/H2O2为例）免疫组化染色阳性细胞在组织中的分布排列形式可以有如下7种：①局灶型；②弥漫型；③片块型；④网状型；⑤腺管型；⑥腔缘型和⑦菊团型，等。这主要取决于抗原抗体复合物在细胞内的分布和阳性细胞在组织内的群体分布特点。
四、阳性标记强度特征依照细胞阳性着色程度（抗原含量），可分为弱阳性（+）┅1分；中等阳性（++）┅2分；强阳性（+++）┅3分。依照阳性细胞数量，可分为：弱阳性（+ ，指阳性细胞总数在25%以下）；
中等阳性（++,指阳性细胞总数在25%—49%)；强阳性（+++ ，指阳性细胞总数在50%以上)。目前多采用积分综合计量。计算公式为：（+）%x1 +（++）%x2+（+++）%x3；总数值<（+），-(++),>(+++)。至少随机观察5-10个HPF。
第五节
染色失败的可能原因
免疫组化染色的基本要求有二：①实验切片的阳性抗原定位准确，呈色鲜明，背景着色浅或无，二者的比值应大于1（阳性/背景）；②对照染色的结果应附合要求。否则，所得实验结果都是错误的，或为假阳性或为假阴性。
假阳性是指实验切片呈阳性，阴性组织对照或阴性试剂对照也呈阳性的结果，谓之假阳性。其原因与内源性干扰，试剂不纯，交叉反应等有关。
假阴性是指实验切片呈阴性，阳性组织对照及阴性试剂对照也均呈阴性的结果，谓之假阴性。其原因与组织处理不当，组织细胞抗原丢失或试剂错误(如漏加、错加、失效、变质等),操作失误等有关。
对照结果判断：
表中1～5结果无效，6、7结果可靠
（＋）
（＋）
（＋）
（－）
（＋）
（＋）
（－）
检测标本含抗体，结果可靠
（＋）
（－）
（－）
7
检测标本不含抗体结合可靠
（－）
（－）
（－）
6
非特异染色
（＋）
（＋）
（－）
5
阳性对照不含定位抗原
（＋）
（－）
（－）
4
阴性对照内含定位抗原
(＋)(－)
（－）
（＋）
3
非特异性染色
（＋）
（＋）
（＋）
2
抗体失活，操作有误
（－）
（－）
（－）
1
结果判断
检测结果
替代对照
阴性对照
阳性对照
染色失败原因：
均为阴性
均为弱阳性（除阴性对照）
背