文档介绍：临床基因扩增检验的质量保证
定 义
正态分布的基本统计学含义可用均数（）、标准差（s）和概率来说明。
临床基因扩增检验实验室 常规测定步骤
标本收集：选择测定项目、标本收集和保存。
实验室测定：标本接收、贴标签、样加热模块孔内温度监测记录系统，当孔间温度变异超出1℃时，其可测出来。
具体做法是将装有TE缓冲液并上加石蜡油的扩增反应管放置于扩增仪各孔中，热电偶探针透过扩增反应管盖插至缓冲液中，然后按程序进行一个常规的PCR扩增，加热模块如为96孔，则至少要测定12孔不同位置孔内的温度，在整个扩增过程中，可移动热电偶探针至上述不同孔中监测温度，但每一孔内温度监测至少要有一个扩增周期。
扩增仪孔间温度的重复性和均一性的检测方法
第二种方法并非直接测定孔内温度，而是通过扩增功能来间接获知孔间的均一性，即将加有一已知的含一定浓度的阳性质控样本的扩增反应管置于扩增仪各孔中按常规进行扩增检测，观察结果的一致性程度，如果有某一个或几个孔结果有问题，则应确定这一个或几个孔是否会重复性地得到假阴性结果，如果是，则表明相应孔的热传导有损坏。
理想的试剂和操作方法
试剂盒的质检
定量测定的精密度是测定组成步骤的变异和的平方根(SD)=
上式中SDa、SDb、SDc是步骤a、b、c等（例如试剂准备、标本采集、核酸提取、扩增和产物检测等）的标准差；
理想的试剂和操作方法
改善测定精密度的措施必须首先着重在最不精密的步骤上，应对试剂准备、标本收集、核酸提取、测定方法和仪器操作写出“标准操作程序”(SOP)
人员培训
临床基因扩增检验的操作主要是标本处理中的核酸提取步骤，这其中所涉及的又主要是加样器的使用，尽管操作简单，但由于均为微量操作，要获得稳定可靠的测定结果，操作人员需要一定的专业技术知识和经验.
知其然又知其所以然。
核酸样本的制备、扩增检测 及其质量控制
一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理
核酸的分离纯化
靶核酸提取的质量
临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和干扰物质
核酸样本制备及扩增检测的质控
产物检测的质控
一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理
靶核酸可以与宿主细胞整合，核内游离及胞浆内各种构形存在于细胞内，如测定的是病原微生物,则靶核酸存在于细菌、病毒、原虫或真菌细胞内，如果上述细胞破裂,则靶核酸亦可存在于细胞外。
一般均使用去垢剂(如Triton-100)裂解细胞，用一种蛋白裂解酶(如蛋白酶K)消化结合于核酸的蛋白质，从而将靶核酸从细胞内释放出来。
核酸的分离纯化
核酸的分离纯化就是要将蛋白、脂类等干扰核酸扩增的物质去除。
经典方法
硅吸附法
对于商品核酸提取试剂盒，临床实验室在使用前，必须对其核酸提取纯度和效率进行评价。
临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和干扰物质
临床标本中：血清或血浆中的血红素及其代谢产物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份 、降解靶核酸的核酸酶等。
核酸提取中：许多试剂如乙二***四乙酸(EDTA)、去垢剂如十二烷基硫酸盐(SDS)和chaotrope试剂如异硫***酸胍和盐酸胍等、酚、***仿、乙醇等有机溶剂 。
对临床标本中可能存在的 抑制/干扰物的质控措施
质控措施： 采用内质控（internal control, IC）（通常称为内标）的方法
内标有两种,即竞争性的和非竞争性的内标。
核酸提取及扩增有效性的质控
已知弱阳性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带1份，其最后的检测结果，应是核酸提取和扩增检测的有效性的综合反映。
已知阴性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带1份，扩增测定的结果可以判断核酸提取过程中是否发生污染。
统计学质量控制
理想的室内质控样本的条件
测定中质控样本的设置、数量及排列顺序
统计学质控的特点
统计质控方法
理想的室内质控样本的条件
基质与待测样本一致；
所含待测物浓度接近试验的决定性水平；
稳定；
靶值或预期结果已定；
无已知的生物传染危险性；
单批可大量获得；
价廉
测定中质控样本的设置、数量及排列顺序
每次检测究竟使用几个质控样本并排在临床标本中的哪个位置最为适宜？从理论上说，为最大可能地检出实验的随机和系统误差，应每隔几份临床标本插入1份质控样本，但考虑国内目前的实际情况及成本效益，一般来说，如果临床基因扩增检验的标本量不是特别大，定性测定有一份接近cut-off的弱阳性和一份阴性质控样本应可以满足要求。而定量测定则要根据试验的测定范围，采用高、中、低三种浓度的质控样本。至于在测定中的排列顺序，可排于标准品或校准品之后，临床样本之前。
临床基因扩增检验室内质控的