文档介绍：1. Viruses such as baculovirus can be concentrated by polyethylene glycol precipitation. 2. Adjust the pH of the virus-containing supernatant to -. Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000) is added toa final concentration of 8% (w/v). 3. Stir at4℃ for 2 hours. 4. Centrifuge at 10,000 xg for 2 hours. 5. Resuspend the pellet ina small volume of appropriate buffer ( ., RNase-free ddH2 for virus RNA prep). 沉淀法- 病毒提纯方法主要是从稀的悬浮液中浓缩病毒,有中性盐沉淀法、聚乙二醇(PEG) 沉淀法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、皂土法和鱼精蛋白沉淀法等。 1. 中性盐沉淀法:病毒一般在 45% 以上饱和度的硫酸铵溶液中沉淀,且保持其感染性。在含有病毒的组织培养液中加入等体积的饱和硫酸铵,可以很容易地沉淀某些病毒如狂犬病毒、鸡新城疫病毒等。 2. 聚乙二醇沉淀法:聚乙二醇(PEG) 为水溶性非离子型聚合物,具有各种不同的分子量,用于病毒沉淀的主要是分子量为 2 000 ~ 6000 的 PEG 。将 PEG 配成 50% 左右的溶液,或直接将固体 PEG 加于病毒悬液中,使其达到所需浓度,通常在 4℃搅拌过夜,然后离心使病毒沉淀。 Tanncock(1985 年) 成功地用 PEG 浓缩了禽脑脊髓炎病毒。 3. 有机溶剂沉淀法:甲醇、***仿、正丁醇、***碳化合物等都可用于提纯病毒,但***、***仿等脂溶剂对于具有脂质囊膜的病毒具有破坏和灭活作用,故不适于这类病毒的浓缩提纯。 4. 等电点沉淀法:病毒粒子在等电点时,所携带的正电荷与负电荷相互中和,因而失去相互排斥的作用而发生沉淀。多数病毒的等电点在 ~ 之间, 因此在 pH3 ~6 范围内均可沉淀, 由于一部分细胞成份在等电点时亦发生沉淀, 此法效果不太理想, 但从感染的组织培养液中浓缩病毒, 可以获得较好结果。应用酸性范围的等电点沉淀或分级沉淀病毒时,必须注意 pH 对病毒活性的影响及病毒粒子电荷与组织蛋白电荷的差异。 5. 皂土法: Girin(1989 年) 应用皂土在酸性条件下(pH4 ~ ) 吸附轮状病毒 SA-11 ,再在碱性条件下( ) ,又使其洗脱下来,从而达到纯化目的。 6. 鱼精蛋白沉淀法: 鱼精蛋白为碱性蛋白, 具有携带其它蛋白质共沉淀的作用, 能和直径大于 50nm 的病毒共同沉淀而不影响病毒的感染力。当向这种沉淀物加入 1mol/LNaCl 时, 病毒又重新释放到悬液中, 而鱼精蛋白仍然沉淀。直径小于 50nm 的小型病毒则不与鱼精蛋白共同沉淀。因此,可利用鱼精蛋白去除病毒材料中直径大于 50nm 的异种蛋白质。聚乙二醇 HOCH2(CH2OCH2)nCH2OH(n > 4)( Polyethylene Glycol 简写为 PEG) , 它的