文档介绍：水飞蓟素总结报告
一、原计划合同内容
1、主要研究内容
本项目是从水飞蓟籽中提取水溶性水飞蓟素。通过对原料的预处理、水溶性水飞蓟素的提取、包合技术、澄清、分离、浓缩、干燥等过程的研究与改进，确定水溶性水l量瓶中，分别精密加2，4-二硝基苯肼溶液（取2，4-，置50ml量瓶中，加硫酸1ml使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀）2ml，置50-55℃水浴中反应50分钟，冷却，加氢氧化钾-甲醇溶液（取氢氧化钾10g，置100ml量瓶中，加水30ml使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀）稀释至刻度，摇匀，离心10分钟，精密量取上清液5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（中国药典2005年版地附录ⅣＡ），在490nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得水飞蓟素含量。
，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取经
60℃减压干燥3小时的水飞蓟宾对照品适量，，作为对照品溶液。精密吸取上述两种溶液各5µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以水飞蓟宾与异水飞蓟峰面积之和计算。试验结果如下图所示。
由图可以看出，随着碱水pH值的下降，水飞蓟素和水飞蓟宾的含量明显上升，可能是由于pH太高会破坏黄***母核，导致含量下降，故碱水提取的pH采用在8-。
2). 提取温度对水溶性水飞蓟素得率和水飞蓟宾含量的影响
分别称取水飞蓟饼500g，加入pH值为8的30%的碱乙醇1500ml，于90℃、80℃和70℃各提取3遍，合并滤液，浓缩成到流膏，体积在500ml时，加入40g 101澄清剂，搅匀，静置1h后，分离上清液，浓缩真空干燥，得粗品，再加入20倍体积纯化水，充分溶解，离心分离上清液，真空浓缩得成品。
同1)法分别测定水溶性水飞蓟素得率和水飞蓟宾含量。试验结果如下图所示。
由图中可以看出，随着温度的降低，水飞蓟素和水飞蓟宾含量在80℃达到最高，且此时水和乙醇的公沸点接近，故采用提取温度在80℃为宜。
提取水溶性水飞蓟素的正交试验
在前期经验的基础上，选择碱水的乙醇液为溶剂，以乙醇用量、乙醇浓度、提取时间为实验因素，每个因素设3个水平，进行L9(34)正交实验。
正交实验的因素和水平
水平
因素
溶剂用量（倍）A
乙醇浓度（%）B
提取时间（h）C
1
6+6+4
40
++
2
8+8+6
35
++
3
10+10+8
30
++
取榨油后的水飞蓟饼，分别精密称取9份，。按表选择的条件分别加入pH＝8的碱水的乙醇液，于
80℃提取3遍，合并滤液，浓缩成流膏，体积在500ml时，加入40g 101澄清剂，搅匀，静置1h后，分离上清液，浓缩真空干燥，得粗品，再加入20倍体积纯化水，充分溶解，离心分离上清液，真空浓缩得成品。加热回流提取，合并提取液，过滤，浓缩，回收乙醇，水浴（60℃）蒸至近干，再于真空干燥箱中（60℃）干燥，，粉碎成粉末。
水飞蓟宾的含量测定方法（HPLC法）及水飞蓟素的含量测定方法（UV法）同上1)法。
对照品溶液的配制和标准曲线的建立
精密称取水飞蓟宾标准品适量， mg·ml-1的溶液。
取对照品溶液10，12，14，16，18，20μl，分别进样，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程。Y=×105X+ ×104，r=。~。
数据处理及结果
对正交实验结果采用综合评价方法，、。综合评价分值=水飞蓟宾含量×+水飞蓟素×，结果下表。
方差分析结果见表，表明乙醇浓度、提取时间对实验结果有显著影响，其中乙醇浓度（B）影响最大，其次是提取时间（C），溶剂用量（A）影响较小。由表2直观分析综合评价R值，最佳提取工艺是A3B2C2，即
30%乙醇提取三次，每次提取2h，前两次加8倍量乙醇，第三次加6倍量乙醇。
以最佳工艺进行验证实验，结果表明该工艺重复性和稳定性好，适于大生产。
正交实验结果
实验号
影响因素
水飞蓟宾(%)
水飞蓟素(%)
综合评价
A
B
C
D