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实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制.ppt

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实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制.ppt

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文档介绍:实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制
培养基的配制方法
配制培养基的最简单的方法是用市售培养基干粉溶解在蒸馏水里,加上蔗糖、琼脂和其他必要的补加物,再加入蒸馏水使之达到最终的容积。最后调节pH值,高压灭菌,于是制成所需实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制
培养基的配制方法
配制培养基的最简单的方法是用市售培养基干粉溶解在蒸馏水里,加上蔗糖、琼脂和其他必要的补加物,再加入蒸馏水使之达到最终的容积。最后调节pH值,高压灭菌,于是制成所需要的培养基。
如果没有培养基干粉,则可采用以下两种方法来配制:
一个是按照配方规定的数量分别称量出各种成分,分别使它们溶解于水,然后再将它们混合在一起。
另一个是先配制一系列的浓缩贮备液(母液),贮存在2~4℃冰箱内,待配培养基时取出,按比例稀释配用。此法较为常用。
MS 培养基母液的配制
母液的配制有两种方法:
一种是配制成单一化合物母液。此法适合配制多种培养基都需要的同一种母液。
另一种是配成几种不同化合物的混合母液。此法在大量配制同种培养基时省时省力。由于MS 培养基较为常用,故配制MS 培养基母液。
配好的母液应放在试剂瓶中贮存。
在配制MS培养基母液时,为减少工作量可以把几种药品(如培养基中的大量元素或微量元素)配在同一母液中,但应注意各种化合物的组合以及加入的先后顺序,以免发生沉淀。
通常把每种试剂单独溶解后再与别的也已完全溶解的药品混合,或者待前一种化合物完全溶解后再加入后一种化合物。混合已溶解的各种矿质盐时还应注意先后顺序,力求把Ca2+与SO42- 和PO43-错开,以免形成硫酸钙或磷酸钙的不溶物。同时,要慢慢地混合,边混合边搅拌。
大量元素母液的配制
MS培养基中的9种大量元素除C、H、O外,剩下的六种可由KNO3、NH4NO3、CaCl2 • 2H20、MgSO4 • 7H2O、KH2PO4几种无机盐来供应,它们可配在同一母液中(具体配制见下表)。配制的步骤为:确定母液的浓度和体积→计算各种化合物用量→称量→分别溶解→混合→定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存。
注意: CaCl2 • 2H20最后加入
母液
种类
成 分
规定用量
/mg• L-1




称取量/mg
母液定容体积/ml
配1L MS培养基吸取取量/ml
大量元素
KNO3
1900
20
38000
1000
50
NH4NO3
1650
33000
CaCl2 • 2H20
440
8800
MgSO4 • 7H2O
370
7400
KH2PO4
170
3400
微量元素母液的配制
MS培养基中的微量元素可由MnSO4 • 4H2O、ZnSO4 • 7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4 • 2H2O、CuSO4 • 5H2O、CoCl2 • 6H2O几种无机盐来供应,它们也可配在同一母液中(具体配制见下表)。配制步骤同大量元素(混合时不要求先后顺序)。
母液
种类
成 分
规定用量
/mg• L-1




称取
量/mg
母液定容体积/ml
配1L 培养基吸取量/ml
微量元素
MnSO4 • H2O

200
3380
1000
5
ZnSO4 • 7H2O

1720
H3BO3

1240
KI

166
Na2MoO4 • 2H2O

50
CuSO4 • 5H2O

5
CoCl2 • 6H2O

5
有机成分母液的配制
MS培养基中所需的维生素和氨基酸等有机成分母液应分别单独配制(具体配制见下表)。配制的步骤为:确定母液的浓度和体积→计算各种化合物用量→称量→溶解→定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存。
亦可配制成混合母液(不主张采用)。
母液
种类
成 分
规定用量
/mg• L-1







/mg
母液定容体积/ml
配1L MS培养基吸取量/ml




甘氨酸

200
100
250
5
盐酸硫***素

5
盐酸吡哆素

25
烟酸

25
肌醇
100
5000
铁盐母液的