文档介绍：实验六血清ALT活性测定1
汇报人:
丙氨酸 +α-***戊二酸 ***酸 + 谷氨酸
ALT（血清）
基质液
在一定反应条件下 ( ，37℃ ) , 作用 30 min：
三、原理：
实验六血清ALT活性测定1
汇报人:
丙氨酸 +α-***戊二酸 ***酸 + 谷氨酸
ALT（血清）
基质液
在一定反应条件下 ( ，37℃ ) , 作用 30 min：
三、原理：
α-***戊二酸
***酸
+ 2,4 二硝基苯肼
α-***戊二酸-2,4二硝基苯腙
***酸-2,4 二硝基苯腙
两者在碱性条件下呈红棕色，等摩尔浓度条件下，***酸 OD 值大 a-***戊二酸 3倍。
四、试剂：省略
2、按下表操作：
加入物（ml）对照管 (B) 测定管 (U)
血清
基质缓冲液 —
混匀，37℃水浴30min（准确记时）
2,4—二硝基苯肼溶液
基质缓冲液 —
混匀，37℃水浴20min；
M NaOH ml，室温放置10 min；
在波长505 nm 处，以蒸馏水校正零点，读取各管吸光
度；根据 (AU--AB) 标准曲线，得到酶活性的卡门氏单位数。
1、将基质缓冲液和血清在 37℃ 水浴箱
预温5min。
五、操作步骤：
3、标准曲线的绘制：
管号 0 1 2 3 4
磷酸盐缓冲液（ml）
***酸标准液（ml） —
基质缓冲液（ml）
相当于酶活性（卡门氏单位） — 28 57 97 150
各管加 2,4- ml，混匀，37℃水浴 20min；
各管加 mol/L ml，混匀，室温放置10min。
波长505 nm处比色，以蒸馏水调零点，读取各管吸光度；
各管读数均减去0号管吸光度，所得差值与对应的卡门氏酶活性单位作图即成标准曲线。
六、结果分析：
正常参考值：5～25卡门氏单位
七、注意事项：
1．一般血清标本内源性***酸很少，血
清对照管吸光度读数接近试剂空白管 ( 以
，其它和对
照管同样操作)，所以大批标本测定时，一般
不需要每一标本都作血清对照管，以试剂空
白管代替即可。但建议对超过正常的标本进
行复查，复查时每份标本应作对照管。
2．严重脂血症或黄疸、溶血的血清可
能会引起测定管吸光度增加，因此检测此类
标本时，应作血清对照管。
3．赖氏法原法标准曲线只到97卡门
氏单位，直线关系很好。超过此活力的标本
应稀释后再测，临床上应用甚为不便，故卫
生部临检中心推荐法建议标准曲线延长到
150卡门氏单位，实际已不完全成直线了，
只能大致反应酶活性的大小、当血清标本酶
活性超过150卡门氏单位时，应将血清用生理盐水或缓冲液稀释5倍后再进
行测定。
4．加入2,4-二硝基苯肼溶液后需充分振荡混匀，否则会影响重复性；加氢氧化钠溶液方法要一致，不同方法也会导致吸光度读数的差异。