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ANTITUMOR MECHANISMS OF POTASSIUM PIPERATE， A DERIVATIVE OF MONGOLIAN MEDICINE GBK作用后细胞活性测定 ．22
2．3．3 GBK药物的选择性抑制作用实验 ．23
2．3．4 GBK与依托泊苷联合用药对细胞活性的的影响 ．23
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万方数据
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2．3．5细胞克隆形成实验 ．：23
2．3．6 GBK对肿瘤细胞周期的影响 ．24
2．3．7癌细胞中总．RNA提取及Microarry检测 ．25
2．3．8 RNA反转录实验 ．26
2．3．9 Real．Time PCR ．26
2．：；．10 Western Blot ．27
2．3．11 GBK对细胞凋亡的影响 29
2．3．12 Caspase 3及Caspase 8活性的测定 ．30
2．3．13 ROS的测定 31
2．3．14 Honchest 33258染色检测细胞核形态变化 。32
2．3．15 NOD／SCID鼠中异种移植模型的建立 ．32
2．3．16免疫组织化学 33
2．4实验结果 35
2．4．1 GBK对癌细胞的选择性抑制作用 ．35
2．4．2 GBK对癌细胞克隆形成的选择性抑制作用 ．36
2．4．3 GBK对3种乳腺癌细胞活性均具有抑制作用 ．39
2．4．4 GBK对乳腺癌细胞周期的影响 ．40
2．4．5人类细胞全基因组芯片结果分析 。4l
2．4．6实时荧光定量PCR验证人类细胞全基因组芯片结果 42
2．4．7 Western blot结果 44
2．4．8 GBK促进MCF．7细胞凋亡 46
2．4．9 GBK增加MCF．7细胞中Caspase 3及Caspase 8活性 48
2．4．10 GBK促进MCF．7细胞ROS的产生 49
2．4．11 GBK促进乳腺癌细胞的细胞核发生凝集 50
2．4．12 NOD／SCD鼠中异种肿瘤模型的建立 ．5l
2．4．13 NOD／SCID鼠组织的免疫组化 ．．53
2．4．14 GBK与依托泊苷联合使用对肿瘤生长的影响 54
2．5讨论 56
2．6结论 57
参考文献 ．．58
致谢 65
攻读学位期间发表的学术论文及参与工程目录 ．．66
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符号说明
缩写符号 英文名称 中文名称
PI Propidium Iodide 碘化丙啶 EDTA Ethylene Diamine Tetra,acetic Acid 2_,--胺四乙酸 SDS Sodium Dodecyl Sulfonate 十二烷基磺酸钠 IC50 halfmaximal inhibitory concentration 半抑制浓度 PBS 磷酸盐缓冲液
PVDF Polyvinylidene Fluoride 聚偏二氟乙烯
印m Revolution per minute 转|分钟
OD Optical density 光密度
PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链反响
DAB Diamindbenzidine 二氨基联苯胺
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