文档介绍：复旦大学上海医学院曦源项目结题报告——
乙型肝炎病毒X蛋白鼠单克隆抗体
的制备与应用
项目参与:周鑫 0556240
谢颖 0556242
张倩倩 0530020
指导老师:叶荣副教授
实验室:BSL3生物安全实验室
目录
序……………………………………………………………………3
摘要…………………………………………………………………4
前言…………………………………………………………………5
乙肝病毒鼠单克隆抗体的制备
材料………………………………………………………………7
方法与结果讨论…………………………………………………7
第二章 X蛋白真核细胞中表达及形态学研究
材料………………………………………………………………12
方法与结果讨论…………………………………………………12
小结与体会…………………………………………………………14
参考文献……………………………………………………………15
体会与提高…………………………………………………………16
致谢…………………………………………………………………17
序
我们的曦源主题,源于导师组叶荣老师的启发,然后便在许多的如意和不如意中进行至今。
我们的小组名义上为三人,事实上却几乎是一个完整的导师组。除去周鑫、谢颖、张倩倩之外,他们还有蔡加君、范旻浩、彭一鸣、陈鹏里——每一个人都来自05级临床医学八年制的大集体。
一个专业性质的科研项目,对于临床和基础外围的尚称不上专业的我们,毫无疑问充满了挑战,时间的安排也显得十分重要。在接近一整年的时间里,课业是紧的,课余时间是少的,组员们却很努力很自觉地为实验留出了时间。由于项目分为两个部分进行,组员也分两拨,按照各自的进度调整安排。在五个周日的晚上,一般每组安排两个人实验,分阶段轮替。组员之间会交代实验的进度,并附有详细的实验记录以便参考。这种相互讨论与询问的方式一直延续至今。
为我们提供实验场所、器材和最宝贵的专业知识技能辅导的是叶荣老师所在的三级生物安全实验室(BSL),叶荣老师及他带领的杨金华、韩文东、丁悦娜、孙志平等各位学长在一年里始终给予着我们莫大的信心和帮助。从实验的原理、仪器的操作和试剂的选用到结果的分析,在老师和学长的倾力相助下,我们对各种分子生物学理论和实践的认识逐渐在提升。对一些关键部分,叶老师和学长亲自示做,以保证结果的可靠性。
实验经费方面,由于分子生物学实验中涉及的试剂多而昂贵,我们的经费部分来自曦源项目的资助,部分则由叶荣老师所在的实验室提供,其中包括了现有的仪器使用、试剂和相关器材的购买等。
感谢这一切,让我们从门外汉变成了初窥科研一斑的新人。
乙型肝炎病毒X蛋白鼠单克隆抗体的制备与应用
摘要乙肝病毒(HBV)X蛋白单克隆抗体的制备有赖于抗原表位特性及其载体的构建,本实验通过双酶切、PCR、连接、转化等分子克隆学技术,建立了三个含不同拷贝X基因片段、不同特性的原核表达载体(PET22b-HBX-A,PET22b-HBX-B,PET22b-HBX-C);该载体在BL21中表达产物经SDS-PAGE分离纯化后免疫BALB/c小鼠,提取血清;免疫后小鼠脾脏细胞与Sp2/0-Ag14骨髓瘤细胞融合;通过Western Blot以小鼠血清多克隆抗体检测表达的X蛋白。-HBx,旨在真核细胞中探讨其表达的X蛋白对细胞功能形态的影响,并结合制备的抗体进行抗原检测。
关键词 HBV,X蛋白,X基因,原核表达载体,真核表达载体,单克隆抗体(McAb)。
Abstract The character of monoclonal antibodies(McAb) against X protein in hepatitis B virus depends on formation of fine expression vectors. Based on this, this study established through molecular cloning techniques a series of prokaryotic expression vectors which contained different copy numbers of X gene(PET22b-HBX-
A,PET22b-HBX-B,PET22b-HBX-C). Expression products of the vectors in BL21 were segregated and purified through SDS-PAGE, thus to be employed in i