文档介绍：HLA抗体分析的流式细胞技术
?医学前沿?
H LA 抗体分析的流式细胞技术3
易　燕　肖露露
广州器官移植配型中心(广州　510095)
3广州市科研基金资助项目(项目编号:97
毒(C omplement 2dependent cytotoxicity ,C DC )技术,经美国国立卫生研究院(National Institutes of Health ,NIH )认可并命名为NIH 2C DC
[2]
,至今仍是肾移植前组织配型的重要技术
标准之一。NIH 2C DC 所需时间约2小时,有实验条件的限制,例如新鲜尸体器官移植时器官冷缺血时间限制,淋巴细胞的活性,IgM 类抗体的影响等;特别是要求技术人员操作熟练、具有丰富的H LA 相关知识和综合分析试验结果的经验。1973年Thomas C 1Fuller 将抗人免疫球蛋白(anti 2
human immunoglobulin ,AHG )介质引入了C DC 反应体系
(Anti 2human globulin 2augmented complement 2dependent cytotoxici 2ty ,AHG 2C DC ),提高了H LA 抗体识别的灵敏度[3],但是,AHG 2C DC 实验中孵育和洗涤的步骤延长了反应时间。有的H LA 实验室因标化AHG 有困难或者为了避免复杂的实验操
作,采取延长NIH 2C DC 的孵育时间或提高孵育温度的方法,也可增加实验的灵敏度。
1983年G arov oy 首次提出了流式细胞交叉配型(Flow cytometry crossmatch ,FCX M )技术,以FIT C 标记的抗2IgG 抗
体检测供者特异性H LA 抗体结合于供者淋巴细胞上的情况[4]。80年代至90年代中期许多欧美的H LA 实验室开展了对FCX M 的研究。1988年Lazda 等对38例尸肾移植FCX M 的回顾性分析,发现FCX M 阳性患者中有35%未发生急性排斥反应,FCX M 阳性组和阴性组的移植效果无统计学差异;他们认为这些FCX M 阳性是非特异性的,FCX M 检出的
IgG 类抗体中包括了抗2H LA 抗体和非H LA 抗体[5]。1996年Maarten 等对114例接受C DC 阴性供体的肾移植受者进行回
顾性FCX M 研究,发现FCX M 阳性受者的急性排斥发生率为53%(8/15),这些受者的1年移植物存活率为80%;
FCX M 阴性受者的急性排斥发生率为41%(41/99),他们的1年移植物存活率为87%,两组间P >0105[6]。1997年Shenton 等对多个移植中心的FCX M 进行综合分析后,发现FCX M 方法学的差异可能是一些实验室的FCX M 结果与临床
移植效果缺乏相关性的原因[7]。因此,FCX M 技术在临床的应用一直受到质疑。
90年代末期,随着流式细胞仪多光束多参数分析技术
的改进、单克隆抗体的研发和分析软件的升级,使FCX M 技术得到极大改善。1998年Bry