文档介绍：货号 : QS3603
规格：50 管/48
样
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶
（ UDP-glucose pyrophospho
货号 : QS3603
规格：50 管/48
样
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶
（ UDP-glucose pyrophosphosphprylase ， UGP）试剂盒说明书
注意：正式测定之前选择
紫外分光光度法
2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
UDPG焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将 1- 磷酸葡萄糖与 UTP分子合成为 UDP葡-萄糖（ UDPG）。
测定原理：
UGP可逆催化反应生成 1 磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和 6- 磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将 NADP转化为 NADPH，340nm的吸光值增加速率反映了 UGP活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、 1 mL 石英比色皿。
试剂组成和配制：
提取液：液体 50mL×1瓶， 4℃保存。
试剂一：液体 25mL×1瓶， 4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶， -20 ℃避光保存。临用前加 5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分
装后 -20 ℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 瓶， -20 ℃避光保存。临用前加 5 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分
装后 -20 ℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 瓶， -20 ℃避光保存。临用前加 5 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分
装后 -20 ℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体 5mL×1瓶， 4℃保存。
酶液提取：
组织：按照质量（ g）：提取液体积 (mL) 为 1：5~10 的比例（建议称取约 ，加入 1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃， 10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。
细胞：按照细胞数量（ 104 个）：提取液体积（ mL）为 500~1000： 1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃， 10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。
液体：直接检测。
测定操作：
分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
取 1mL石英比色皿，依次加入 500μL 试剂一， 100μ L 试剂二， 100μL 试剂三， 100μ L 试
剂四， 100μ L 试剂五， 100μL 粗酶液，充分混匀，记录 340nm处 30s 的吸光值 A1 和 330s
的吸光值 A2，△ A=A2-A1
计算公式：
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克