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1961年国际酶学委员会〔Enzyme mittee,EC〕根据酶所催化的反响类型和机理,把酶分成6大类。如表1所示:
表1 酶的分类及其反响本质
大类
反响本质
亚类
亚—亚类
氧化复原酶
电子转移
供体中被氧化基团的性质
受体的类型
转移酶
基团转移
被转移基团的性质
被转移的基团的进一步描述
水解酶
水解
被水解的键的类型〔酯键、肽键〕
底物的类型:糖苷、肽等
裂合酶
键裂开
被裂开的键:C-S、C-N等
被消去的基团
异构酶
异构化
反响的类型
底物的类别、反响的类型和手性的位置
连接酶
键形成
被合成的键:C-C、C-O、C-N等
底物S1、底物S2、第三底物〔共底物〕几乎是核苷酸
自然界中,一切生命现象都与酶有关,生物体的新代过程都在酶的催化作用下进展,并受酶的控制和调节。如果离开了酶,新代就不能进展,生命也就停顿。因此,酶学的研究有着重大的理论和实践意义。近年来,分子生物学领域,在不断涌现的新方法和新技术的推动下,使酶的构造与功能的关系愈加清晰。本文以纤维素酶为具体例子,详细介绍了纤维素酶的来源、构造、催化机制、应用等容。
2 纤维素酶的概念
自1906年从蜗牛消化道发现纤维素酶以来,陆续报道了细菌、放线菌、丝状真菌等许多微生物中纤维素酶的存在。1954年开场,美军Natick实验室就已研究了军用纤维素材料微生物降解的防护问题,后来发现纤维素经微生物降解后,可产生经济、丰富的生产原料,且有望解决自然界不断产生的固体废物问题,于是纤维素酶得到了广泛的关注。
纤维素酶的来源
不同的微生物合成的纤维素酶在组成上有显著的差异,对纤维素的降解能力也大不一样。自然界可以产生纤维素酶的微生物主要有细菌、放线菌、真菌等。由于放线菌的纤维素酶产量极低,研究很少;细菌的产量也不高,且主要是切葡聚糖酶,大多数菌所产纤维素酶对结晶纤维素没有活性,另外,所产生的酶是胞酶或吸附于细胞壁上,很少能分泌到细胞外,增加提取纯化难度,在工业上很少应用。目前,用于生产纤维素酶的微生物菌种大多都是丝状真菌,其中产酶活力较强的菌种为木霉属(Trichoder-ma)、曲霉属(Aspergillus)和青霉属(Penicillium)
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,特别是里氏木霉(Trichoderma reesei)及其近缘菌株较为典型。丝状真菌具有产酶的诸多优点:产生的纤维素酶为胞外酶,便于酶的别离和提取;产酶效率高,且产生纤维素酶的酶系构造较为合理;同时可产生许多半纤维素酶、果胶酶、淀粉酶等。同时,其生长环境粗放、酶易提取,且菌株平安无毒,因而里氏木霉被公认为是最具有工业应用价值的纤维素酶生产菌[3]。
纤维素酶的构造
关于纤维素酶的构造,第一次报道是Pettersson和Bhikhabhai关于里氏木霉的I型外切纤维素酶的氨基酸序列中,发现其与来自同物种的切葡聚糖酶相关[4]。丝状真菌所产的典型游离纤维素酶分子具有多构造域的构架,包括碳水化合物结合模块(Cellulose-binding module,CBM),其通过柔性的连接肽 (Linker) 连接至催化构造域 (Catalyticdomain,CD) 上,另外局部酶分子还含有其他构造域。构成厌氧细菌纤维小体的纤维素酶分子一般由一个对接模块 (Dockerin) 通过连接肽与一个催化构造域 (CD) 连接,其中对接模块可与支架蛋白(Scaffoldin,又称作脚手架蛋白)的粘连模块 (Cohesin) 结合,而支架蛋白一般还会存在一个 CBM[5]。CBM 在结合及降解天然纤维素的过程中具有