文档介绍：5第五讲分子克隆载体
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按功能分：
克隆载体
表达载体
质粒克隆载体 (plasmid clo
构建质粒克隆载体的基本策略
，并作为质粒克隆载体，希望在受体细胞中有较多的拷贝数。
***段克隆的位点，并这样的克隆位点应尽可能多。
。
。
，使构建的质粒克隆载体中组装各种元件，构建成不同用途的质粒克隆载体。
质粒的命名
用小写字母p代表质粒（plasmid），在p字母后用两个或三个大写字母代表发现这一质粒的作者或实验室名称，再加上质粒编号。
如：pBR322：p表示一种质粒，而“BR”则是分别取自该质粒的两位主要构建者F. Bolivar和R. L. Rodriguez，322为编号。
选择标记基因：(用于鉴别目的DNA的存在，将成功转化了载体的宿主挑选出来）
(1)氨苄青霉素抗性基因 (ampr apr)
(2)卡那霉素抗性基因 (kanr kmr)
(3)四环素抗性基因 （tcr tetr）
(4)***霉素抗性基因 (cmpr cmr)
(5)新霉素抗性基因（neor）
pBR322的大小是4361bp的环状双链DNA，其碱基序列已经全部清楚。是最早应用于基因工程的载体之一。
含有24种限制酶的单一识别位点，具有四环素抗性基因(tetr)和氨苄青霉素抗性基因(ampr)。
将质粒pSF124中含ampr基因的DN***段和质粒pSC101中含tetr基因的DN***段同含ColE1复制起始点(来源于pMB1、松散型)的DN***段重组，构建成质粒克隆载体pBR322。
pBR322
普通型载体pBR322的结构图
pBR322
如何筛选？
利用Tetr基因内部的BamHI位点来插入外源DN***段，可以通过插入失活进行筛选。
BamHI G/GATTC
经重组DNA分子转化处理的受体菌在不含标记药物tc的琼脂培养基上培养，则含或不含重组DNA分子的受体菌都能长出菌落。
然后取菌落的一部分接种在含tc 的琼脂培养基上，不会长出菌落的原菌落才是真正在tcr基因区插入外源DN***段的克隆子。
（为什么？）
pUC质粒
pUC质粒系列是在pBR322基础上改建成的；
包括pBR322的ampr基因；
缺乏控制拷贝数的rop基因。
pUC的主要优点：
（1）分子量更小，仅为2686bp，容纳外源DNA量增大；具有更高的拷贝数（每个细胞含500-700个拷贝）。
（2）含易于检测是否有外源DNA插入的标记基因LacZ，可利用-互补原理进行蓝白筛选。
（3）多克隆位点区（MCS）由人工合成的多个单一酶切位点构成。
pUC18
pUC19
含四个部分：
（1）来自pBR322的质粒复制起点（ori）；
（2）ampr ;
（3）大肠杆菌β半乳糖苷酶基因（lacZ）的启动子及其编码α-肽链的DNA序列；
（4）多克隆位点（MCS）
lacZ`
Ori
Ampr
MCS
Blue White
ampr
ampr
Insert
Insert
No
insert
Lac Z`
Lac Z`
λ噬菌体载体
（lambda phage vector）
把感染细菌的病毒称为噬菌体。
病毒主要有DNA（或RNA）和外壳蛋白组成。通过感染，病毒颗粒进入宿主细胞。
T2噬菌体结构示意图
λ噬菌体的性质
1 λ噬菌体由λDNA和外壳蛋白组成。
2 在噬菌体中DNA是线性的，全长48502bp，左右各有12个核苷酸组成的5’凸出黏性末端，而且是互补的。
5‘GGGCGGCGACCTNN……..NN3’
3’NN……..CCCGCCGCTGGA5’
把此末端称为 COS位点(cohesive