文档介绍：总则实验微生物形态观察
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如何进行环境生物学实验
严肃认真
科学态度
分析问题
搞清原理
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实验安排与考核
预****情况+实验操作+总结
注意事项：①涂片不宜过厚 ②火焰固定不宜过热 ③滴加染色液与酒精时一定要覆盖整个菌膜 ④乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。
2、革兰氏染色技术
涂片
干燥
固定
草酸铵结晶紫初染
碘液媒染
95%乙醇脱色
沙黄复染
镜检
1min
1min
1min
水洗
水洗
水洗
水洗
30s
滤纸吸干
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1
2
3
4
？
结晶紫
碘液
酒精
复红
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1、简单染色
(四）实验方法：
制片→染色→水洗→干燥→镜检
（1）制片：取菌种培养物常规涂片、自然干燥、加热固定；
注意无菌操作
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（2）染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染色1-2min。
（3）水洗：用水洗去涂片上的染色液。
（4）干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。
（5）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。
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crystal violet stain wash with water
Stain with gram's iodine solution Decolorize by adding 95% alcohol
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革兰氏阴性杆菌
革兰氏阳性杆菌
Counterstain with Safranin
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①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净：
。
-3次。
-3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。将显微镜小心轻拿。
②观察后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净，放入回收容器内。
（10）实验完毕后的处理
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1、载玻片要洁净无油迹。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，涂片要均匀，菌膜宜薄。
2、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。
？
（五）注意事项
3、染色过程中勿使染色液干涸。
4、选用幼龄的细菌。
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不经复染这一步，能否区别革兰氏阳性菌和阴性菌？
哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?其中最关键的环节是什么?
实验报告
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显微镜的使用
显微镜的构造：分机械装置和光学系统
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实验原理
增加照明亮度 在镜头与标本玻片之间滴上与玻璃的折射率相仿的油类，则光线不发生折射，从而增加了视野的照明亮度
增加显微镜的分辨力 指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力
油镜的工作原理
如香柏油(n=)
分辨力(最大可分辨距离)=λ/2NA
以空气为介质时，NA=1×=
以香柏油为介质时，NA=×=
分辩力较高，故细菌用油镜才可观察到
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,以免损坏。 ，不能用手指或粗布，以保证光洁度 ，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 ，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的****惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。