文档介绍：第卷第期集关大学学报自然科学版. .
年月.
文章编号———
中国鲎微卫星引物扩增圆尾鲎的反应体系优化
莫然,谢仰杰,肖志群,翁朝红。
.集美大学水产学院,福建厦门;.福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室,
福建厦门;.浙江海洋学院水产学院,浙江舟山
摘要采用正交设计法,从浓度、引物浓度、’浓度、聚合酶用量个因素个
水平出发,
正交试验结果,最终建立了圆尾鲎—最佳反应体系:总体积,聚合酶.、
./、引物./、./;并通过梯度实验进一步优化模板质量
浓度、退火温度及退火时间,获得最佳反应条件:模板质量浓度为/,退火温度为℃,退
火时间为~.对最佳反应体系和反应条件进行了检验,结果显示该反应体系稳定性高、重复性好.
关键词圆尾鲎;中国鲎微卫星引物;;正交优化
中图分类号】文献标志码】
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收稿期—【修回日期——
基金项目福建科技厅类项目;浙江海洋学院“海洋渔业科学与技术”省重中之重学科开放
课题
作者简介莫然一,女,本科生,:..:翁
朝红一,女,副教授,:...
· 集美大学学报自然科学版第卷
引言
圆尾鲎东南亚鲎,属于节肢动物门有螯亚门
肢口纲剑尾目鲎科蝎鲎属
⋯,是世界上仅存肢口纲的种鲎之一其他种分别为中国鲎
,巨鲎和美洲鲎,分布于东南亚海域、我国北部湾、
,自从亿多年前的早古生代出现至
今,形态结构及其生理生态特点无太大的变化,是动物界屈指可数的“活化石”之一【】.
微卫星又称简单重复序列,,是指由约
一个核苷酸为核心序列多次串联重复组成的序列,广泛分布于真核生物的基因组中,其以孟
德尔共显性方式遗传,
用于检测物种的亲缘关系及物种的遗传多样性.
在—扩增反应中,其稳定性和重复性容易受到引物浓度、浓度、酶浓度、
,
散和整齐可比的特点,
正交试验设计引物浓度、浓度、酶浓度、¨浓度个因素个水平,并结合单因素
试验方法引物的最适退火时间、退火温度、模板质量浓度,利用本课题组已筛选获得的中
国鲎微卫星引物,对圆尾鲎—反应体系进行优化,运用直观分析的方法对正交试验结果进行
分析,以获得最佳反应体系,为后续圆尾鲎群体遗传多样性分析奠定基础.
材料与方法
. 材料与试剂
%—
反应的、聚合酶、及均为产品,来自宝生物大连有限公
司. 引物由广州英骏公司合成.
. 基因组的提取
%的琼脂糖凝胶电泳,检测的完整