文档介绍：实验二培养基的制备
一、目的要求
1. 掌握培养基制备的原则；
2. 掌握培养基的制备方法。
二、实验原理
1、培养基的概念？
培养基是指由人工方法配合而成的营养基质，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存菌种用的混合营养配方的选定
培养基的制备记录
培养基成分的称取
培养基各成份的混合和溶化
培养基pH的调正
培养基的过滤
培养基的分装
培养基的灭菌
培养基的质量测试
培养基的保存
可先用温水加热并随时搅动、以防焦化。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化，直至煮沸。
在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。
4、培养基制备的基本方法
培养基配方的选定
培养基的制备记录
培养基成分的称取
培养基各成份的混合和溶化
培养基pH的调正
培养基的过滤
培养基的分装
培养基的灭菌
培养基的质量测试
培养基的保存
经加热煮沸，培养基各成分完全溶解, 待冷却接近室温时,应进行pH的调正。
4、培养基制备的基本方法
培养基配方的选定
培养基的制备记录
培养基成分的称取
培养基各成份的混合和溶化
培养基pH的调正
培养基的过滤
培养基的分装
培养基的灭菌
培养基的质量测试
培养基的保存
培养基必须均质透明。
通常采用过滤以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法。
4、培养基制备的基本方法
培养基配方的选定
培养基的制备记录
培养基成分的称取
培养基各成份的混合和溶化
培养基pH的调正
培养基的过滤
培养基的分装
培养基的灭菌
培养基的质量测试
培养基的保存
应按使用的目的和要求，分装于适当容器内。
分装量一般超过容器装盛量的2/3。
4、培养基制备的基本方法
培养基配方的选定
培养基的制备记录
培养基成分的称取
培养基各成份的混合和溶化
培养基pH的调正
培养基的过滤
培养基的分装
培养基的灭菌
培养基的质量测试
培养基的保存
一般采用高压蒸汽灭菌方法（121℃，15min）。
某些畏热成分，如糖类、血清等，一般以过滤方法除菌，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。
4、培养基制备的基本方法
培养基配方的选定
培养基的制备记录
培养基成分的称取
培养基各成份的混合和溶化
培养基pH的调正
培养基的过滤
培养基的分装
培养基的灭菌
培养基的质量测试
培养基的保存
灭菌以后，应仔细检查，如发现破裂、水分浸入、色泽异常等、均应挑出弃去。
将全部培养基放入37 ℃ 恒温箱培养过夜，如发现有细菌生长，即弃去。
用已知菌株接种部分培养基,培养24~48h。如无菌生长或生长不良，应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去。
4、培养基制备的基本方法
培养基配方的选定
培养基的制备记录
培养基成分的称取
培养基各成份的混合和溶化
培养基pH的调正
培养基的过滤
培养基的分装
培养基的灭菌
培养基的质量测试
培养基的保存
应存放于冷暗处，最好放于普通冰箱内；
平板培养基不宜超过3天；
必须附有明显标签。
三、实验材料
量杯（1000mL和500mL各1个）、玻璃棒、漏斗、三角瓶、试管、玻璃瓶（500mL）等；
pH试纸、纱布、脱脂棉、滤纸、包装纸、扎线等；
牛肉膏、蛋白胨、***化钠、磷酸氢二钾、琼脂、葡萄糖、牛肉渣、蜡块、蒸馏水、l mo1/L NaOH溶液和1 mo1/L HCl溶液等。
四、实验内容
普通肉汤的制备：
（1）常用配方:
牛肉浸膏 3-5g
蛋白胨 10g
***化钠 5g
磷酸氢二钾
蒸馏水 1000mL
四、实验内容
普通肉汤的制备：
（2）配制方法:
取水600~700mL，加热；
按照配方称取各物品加入水中，边加热边搅拌，快沸时注意不要溢出，沸腾后停止加热；冷却至室温；
-。
若pH>， HCl调低;
若pH<， NaOH调高.
调好pH值后，补足水量至1000mL，再测pH值。
四、实验内容
厌氧肉汤的制备：
配制方法:
取制备好的普通肉汤5mL，装于试管中，加入牛肉渣、蜡块少许即可。
四、实验内容
普通琼脂的制备：
普通肉汤 1000mL
琼脂 20g
取普通肉汤 400mL于500mL瓶中;
加入优质琼脂8g;
盖好瓶塞，并用纱布扎口。
配方:
配制方法:
琼脂的凝胶化温度一般在35℃～40℃,而凝胶熔点应在75℃～85℃
常见凝固剂有琼脂、明胶、无机硅胶等
四、实验内容
高压灭菌
将所有要高压的物品整齐的摆放在高压灭菌锅内；
盖好压力盖，关闭放气孔，接通电源；
，关闭电源缓慢放气