文档介绍：: .
ICS

普通离心机。
恒温孵育器。
漩涡振荡器。
组织匀浆器。
生物安全柜。
PCR 超净工作台。
冰箱（-20℃）。
微量移液器（~2μL，1~10μL，10~100μL，100~1000μL）。
灭菌离心管（、2mL、5mL、15mL），灭菌吸头（10μL，200μL，1mL），灭菌 PCR 扩增
反应管（ mL，八连管或 96 孔板）。
聚乙烯薄膜袋：90mm×150mm 自封袋，使用前紫外灭菌 20min。
采样工具：剪刀、镊子和灭菌棉拭子等。
6 试剂
除特别说明外，所有实验用试剂均为分析纯；实验用水为去离子水。
灭菌 PBS。配制方法见附录 A。
DNA 抽提试剂：基因组 DNA 提取试剂盒 DNeasy Blood & Tissue Kit 或其他等效产品。
无水乙醇。
PCR 试剂：Premix Taq TM（Version plus dye）或其他等效产品。
实时荧光 PCR 试剂：Premix Ex Taq™ (Probe qPCR)或其他等效产品。
DNA 相对分子质量标准：100bp~2 000bp。
50×TAE 电泳缓冲液，配制方法见附录 A。
溴化乙锭：10mg/mL，配制方法见附录 A，或其他等效产品。
%琼脂糖凝胶，配制方法见附录 A。
引物和探针：根据表 1 和表 2 的序列合成引物和探针，引物和探针加无灭菌去离子水配制成
10μmol/L 储备液，-20℃保存。
表 1 普通 PCR 检测引物
3T/CALAS XXXXX—XXXX
产物大小
引物名称引物序列（5’→3’）检测基因
（bp）
Forward primer AGCGTTTGCTTCACTTTGAA
16sRNA 266
Reverse primer GGGCATTTCCTCCCTAAGCT
表 2 实时荧光 RT-PCR 扩增引物和探针
引物和探针名称引物和探针序列（5’→3’）产物大小（bp）
Forward primer GGAAATGCCCTAAGTATGACGG
Reverse primer CGGATAACGCTTGCACCCTA 94
Probe FAM-CCTTGTCAGAAAGCACCGGCTAACTATGTG -BHQ-1
注：探针也可选用具有与FAM和BHQ-1荧光基团相同检测效果的其他合适的荧光报告基团和荧光淬灭基