文档介绍：酶联免疫吸附测定法
酶结合物是酶与抗体或抗原联结的产物。具有酶促反应，显示出生物放大作用。在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和碱性磷酸酶(alkaline ph酶联免疫吸附测定法
酶结合物是酶与抗体或抗原联结的产物。具有酶促反应，显示出生物放大作用。在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosohatase, AP)。
酶的底物
1、HRP催化过氧化物的氧化反应。
供氢体：邻苯二***(OPD)、四***联苯***(TMB)
OPD氧化后的产物呈橙红色，用酸终止酶反应后，最适吸收波长为492nm
TMB经HRP作用后共产物显蓝色，用HCL或H2SO4终止后，由蓝色呈黄色，最适吸收波长为405nm
2、AP为磷酸酯酶
一般采用对硝基苯磷酸酯(p-NPP)作为底物。产物为黄色的对硝基酚，在405nm波长处有吸收峰。用NaOH终止酶反应
阳性对照品(positive control)和阴性对照品(negative control)
阴性对照品须先行检测，确定其中不含待测物质。
阳性对照品在含蛋白保护剂的缓冲液中加入一定量的待检物质，含量约为最低检测敏感度的10~20倍。
洗涤液 %吐温20的磷酸盐缓冲液。
酶反应终止液　　
HRP反应终止液为硫酸，一般采用2mol/L
AP用NaOH终止
实验方法:
1.　加样：，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。 2.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)。37℃～1小时，洗涤。 3.　加底物液显色：，37℃10～30分钟。 4.　终止反应：。 5.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，，即为阳性。
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