文档介绍：生物技术制药第一章绪论药学一级学科分类: 药物化学、药剂学、药理学、药物分析、生药学及微生物与生化药学二级学科★生物技术与生物技术药物的概念生物技术药物的分类?按用途分类:治疗药物、预防药物、作为诊断药物( 免疫诊断试剂、酶诊断试剂、器官功能诊断药物、放射性核素诊断药物、诊断用单克隆抗体( McAb )、诊断用 DNA 芯片) ?按作用类型分类:细胞因子类药物、激素类药物、酶与辅酶类药物、疫苗、单克隆抗体药物、反义核酸药物、 RNA 干扰(RNAi) 药物、基因治疗药物?按生化特性分类:多肽类药物、蛋白质类药物、核酸类药物、聚乙二醇(PEG) 化多肽或蛋白质药物★生物技术药物的特性?理化性质特性:相对分子量大、结构复杂、稳定性差?药理学作用特性:活性与作用机制明确、作用针对性强、毒性低、体内半衰期短、有种属特异性、可产生免疫原性?生产制备特性:药物分子在原料中的含量低、原料液中长存在降解目标产物的杂质、制备工艺条件温和、分离纯化困难、产品易受有害物质污染?质量控制特性: 质量标准内容的特殊性、制造项下的特殊规定、检定项下的特殊规定( 原液、半成品及成品检定等等) 第二章基因工程制药蛋白类药物的特点: 结构确证不完全性、具有种属特异性、多功能性、免疫原性临床前安全性评价的特殊性: 蛋白类药物安全性担忧的性质和来源; 受试物的纯度; 相关动物的选择; 给药剂量的选择; 免疫原性; 遗传毒性和致癌性(一般不进行常规的遗传毒性实验); 药代动力学真核细胞表达制品的安全性问题: 生产细胞 DNA 残留的影响、生产用血清的影响基因工程药物稳定性研究的相关问题: 药物浓度、温度、湿度和水分、氧、光照、 pH 基因工程药物的缺陷: 生物利用度低, 半衰期短;异体蛋白具有免疫原性基因工程菌的修饰改造方法: 构建突变体、构建融合蛋白、 PEG 修饰( 降低免疫原性、增加水溶性、延长 t 1/2) 基因工程制药基本环节?上游阶段:制备目的基因→构建重组质粒→构建工程细胞?下游阶段:培养工程细胞→分离纯化产物→除菌→半成品、成品检定→包装基本工具: 目的基因、各种酶( 切割酶、连接酶、修饰酶等) 、载体、宿主细胞?酶切结果:5’粘性末端、 3’粘性末端、平头末端? 1U 核酸内切酶的酶活性:指在最佳反应条件下反应 1 小时,完全水解 1mg 标准 DNA 所需的酶量?影响限制性内切酶反应的因素: ? DNA 样品的纯度: ? DNA 的甲基化程度:核酸限制性内切酶不能够切割甲基化的核苷酸序列。在基因克隆中要使用甲基化酶缺陷型细菌菌株制备质粒 DNA 。?酶切反应的温度? DNA 的分子结构?反应缓冲液组成?反应时间、反应体积等?工具酶?核酸限制性内切酶: 识别、水解外源的双链 DNA 分子上特定的核苷酸序列。主要存在于原核微生物中。?同裂酶:指来源不同,识别序列相同的酶;进行同样的切割,产生相同的末端?同尾酶:来源不同,识别序列不同,但产生相同的粘性末端 DNA 甲基化酶: 具有宿主专一性, 对宿主自身 DNA 上特定核苷酸进行甲基化修饰, 避免被自身限制性内切酶水解? DNA 连接酶? T4 噬菌体连接酶:连接双链 DNA 切口,或带粘性末端或平头末端的 DNA 片段?大肠杆菌 DNA 连接酶: 连接双链 DNA 切口, 或带粘性末端的 DNA 片, 不能连接带平头末端的 DN A 片段?聚合酶: 以 DNA 或 RNA 为模板,将核苷酸连续加至 3’-OH 末端,合成方向为 5’→3’。 DNA 聚合酶、 RNA 聚合酶?大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ:5’→3’ DNA 聚合酶活性; 5’→3’ DNA 外切酶活性; 3’→5’ DNA 外切酶活性; RNA H 酶活性? Klenow 酶:不具备 5’→3’ DNA 外切酶活性? T4 噬菌体 DNA 聚合酶:不具备 5’→3’ DNA 外切酶活性。外切酶活性比 Klenow 酶强 200 倍,对单链 DNA 作用强于双链 DNA ? T7 噬菌体 DNA 聚合酶:不具备 5’→3’ DNA 外切酶活性? Taq DNA 聚合酶?反转录酶:催化以 RNA 或 DNA 为模板,合成 DNA ;具有 RNA H 酶的活性?末端脱氧核苷酸转移酶:催化 dNTP 沿5’→3’聚合,逐个加于线性 DNA 分子的 3’末端;不需要模板?载体: (vector) 来源于质粒、噬菌体或病毒的 DNA 分子, 可供插入或克隆目的基因或 DNA , 并具有运载外源 DNA 导入宿主细胞的能力。?质粒载体: 共价闭合环状 cDNA) ; 开环 DNA(ocDNA) ; 线状 DNA(lDNA) ?质粒的三个重要性质:遗传传递的能力;遗传交换的能力;不相容性?用于克隆的质粒的三个要素:复制子、选择标记、多克隆位点?常用质