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抗生素最低抑菌浓度(MIC)和半数抑菌浓度(MIC)测定方法
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抗生素最低抑菌浓度(MIC)和半数抑菌浓度(MIC)测定方法
(如1280g/ml)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。抗菌药物直接购自厂商或相关机构。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。例如:需配制100ml浓度为1280g/ml的抗生素贮存液,所用抗生素为粉剂,其药物的有效力为750卩g/mg。。根据公式计算所需稀释剂用量为:()/1280卩g/ml=,。制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60C以下环境,保存期不超过6个月。
药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCL皈菌药物敏感性试验操作标准,药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值,特殊情况例外。
培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton(MH肉汤,~。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时,应在肉汤中加入2%
(W/V氯化钠,按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤,肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5溶解马血的MH肉汤。
接种物的制备有2种方法配制接种物,一是细菌生长方法,用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个,接种于4-5ml的水解酪蛋白(MH肉汤中,35C孵育2-6h。,约含1~2X108CFU/m。二是直接菌落悬液配制法,对某些苛养菌,如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株,推荐直接取培养18~。用MH肉汤将上述菌悬液进行1:100稀释后备用。注意应在15分钟内接种完配制好的接种物,并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养,以检查接种物纯度。
稀释抗菌药物的制备及菌液接种取无菌试管(13X100mm13支,排成一排,,其余每管加入MH肉汤1ml,在第1管加入抗菌药物原液(如1280卩g/ml),然后吸取1ml至第2管,混匀后再吸取1ml至第3管,如此连续倍比稀释至第11管,并从第11管中吸取1ml弃去,第12管为不含药物的生长对照。此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、、。然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml,使每管最终菌液浓度约为5X105CFU/m。第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、