文档介绍：高效液相色谱使用与维护
可爱卡通创意手绘通用PPT幻灯片演讲
高效液相色谱仪组成
输液系统
进样系统
分离系统
检测系统
数据记录处理系统
溶剂
色谱泵
自动进样器
HPLC色谱柱
检测器
废液
数据处理的类型相同, 分离因子变化不大。因此专门研究了各种溶剂的选择性, 并将常用溶剂进行分类。
质子给予体
偶极相互作用
质子接受体
溶剂选择性分类三角形图
Xe
Xd
Xn
1
2
3
4
5
6
7
8
纯质子接受体
强偶极中性化合物
纯质子给予体
1 组：脂肪醚（纯质子接受体）
2 组：脂肪醇（质子接受-给予体）
3 组：吡啶衍生物、四氢呋喃（质子接受体，易极化）
4 组：乙二醇、苄醇、乙酸、甲酰***（质子给予体）
5 组：二***甲烷、二***乙烷（大偶极距）
6 组：脂肪***、酯、二氧六环、***
7 组：芳烃、芳醚、硝基甲烷
8 组：***代醇、***仿、水（质子给予体）
质子给予体
偶极相互作用
质子接受体
反相色谱中的溶剂选择性
1
甲醇2
TFH3
4
5
乙***6
7
水8
质子给予体
偶极相互作用
质子接受体
正相色谱中的溶剂选择性
醚 1
2
3
4
二***乙烷 5
乙*** 6
7
8
CHCl3 8
主溶剂：己烷
按溶剂分子的特殊作用类型分类, 采用三个不同的常数表示：
① Xe(接受质子参数)~易与含羟基的分子作用(如酸类、酚类)；
② Xd(给质子参数)~易与碱性化合物作用(如***、亚砜等)；
③ Xn(强偶极参数)~易与偶极距较大的溶质分子作用(如硝基化合物、***、亚砜和***类等)。
通常把常用溶剂分成八组。同一组溶剂的三个选择性参数相近，其选择性相似。当某一溶剂不能提供足够的分离选择性时, 那么更换同组的其它溶剂亦不能提高选择性。改变溶剂时, 只有从距离较远的溶剂组挑选, 才可能使选择性有较大变化。因为当溶剂和样品分子的各种相互作用的相对重要性发生明显变化时, 流动相的选择性才会发生最大程度的改变。
流动相的优化
流动相的优化主要是考察流动相组成对保留时间、分离因子和分离度等参数的影响。
使用混合溶剂最大优点是：获得最佳的分离选择性；保持流动相的低粘度, 从而保证高的柱效。
在吸附色谱中混合溶剂选择规则：混合溶剂中极性强的组分含量大或小时, 有最大的值；能与溶质发生氢键作用的溶剂, 有较好的分离选择性。
水相
纯水
缓冲溶液
有机相
纯有机相
混合有机相
缓冲有机相
对溶剂的要求
水：
去离子水 自动纯水仪
重蒸水 重蒸水装置
纯净水 商品瓶装水
有机溶剂:
色谱纯（国产、进口、进口分装）
重蒸 旋转蒸发仪
因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高
纯化水中去除了无机和有机的污染物
波长 (nm)
纯化水
去离子水
吸光率
水
有机溶剂
溶剂的等级
HPLC级
优级纯
分析纯
(除纤维毛,未溶解的机械颗粒
优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂
,且除去有紫外吸收的杂质
微量分析、梯度洗脱
甲醇 乙睛 正己烷
分析纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图
水 / MeOH梯度
ODS 柱
鬼峰
Gradient Curve
1 ml/min, 0-100% MeOH
over 10 mins and hold for
15 mins.
鬼峰的出现
流动相溶剂的处理
水
将一般的蒸馏水，加入少许高锰酸钾，在pH9—10的条件蒸馏，可用于常规洗脱。
用于梯度洗脱的水，应进行二次蒸馏。
不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质要求越高放置时间越短。
，，除去热源、有机物、无机离子及空气等。
有机溶剂的提纯
◆用蒸馏法可除掉大部分有紫外吸收的杂质。
◆氧化铝或硅胶柱可除去溶剂中的极性化合物。
◆***仿中（少量甲醇）先水洗，再蒸馏。
◆四氢呋喃