文档介绍：杀菌剂生物测定技术
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杀菌剂室内生物测定的主要内容是将杀菌物质作用于细菌、真菌或其他病原微生物，根据其作用的大小来判定药剂的毒力。或将杀菌物质施于植物，对病害发生的有无或轻重观察比较来判（2）生长速率法
（3）最小浓度法
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基本原理是在已经接种供试菌的洋菜培养基（通常在培养皿内）表面，利用各种方法（管碟法，滤纸片法，孔碟法）使药液和培养基接触，恒温培养一定时间后，由于药剂的渗透扩散作用，施药部位周围的病菌被杀死或生长受到抑制，从而产生了抑制圏。根据抑菌圈的大小来比较不同杀菌剂的毒力大小。
（1）抑菌圈法的原理
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抑菌圏法的优点
精确度高
操作简单
抑菌圏法的缺点
溶解性
扩散性
抑菌圏法的优缺点
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抑菌圈法示意图
含有孢子的培养基
不同浓度的药液
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根据施加药剂在洋菜培养基表面的方式，抑菌圈法又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法。
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（1）用灭菌蒸馏水将供试药剂配制成一系列梯度浓度，一般5~7个浓度。
（ 2 ）制备一定“浓度”的供试菌悬浮液（如真菌，则宜用孢子悬浮液），浓度以在低倍镜（15X10倍）下每视野80一100个左右孢子为宜。
管碟法　又称牛津杯法
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（3）待培养基冷至50℃左右（凭经验估计），迅速吸取10ml菌液加入培养基内，充分混合后，倒入灭菌的培养皿中，制成含菌培养基平板。
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（4）在每皿培养基上按合适的间隔放置6个不锈钢小管（即牛津杯，。，），其中1个管为对照，其余5管为5个不同浓度的药液，在适合的温度下培养一段时间，取出用十字交叉法测是抑菌圈的直径。
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抑菌圈法示意图
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上述操作应尽量在无菌条件下进行，　　以防污染
操作室的温度最好在26～28℃左右，　如室温太低，则50℃左右的培养基在操作过程中迅速冷凝，无法制作平板
十字交叉法测量抑菌圈的直径，消除误差
注意事项
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（1）　配制不同浓度的药液
（2）　配孢子悬浮液　　　　
（3）制含孢子的平板
滤纸片法
前三步完全和上述管碟法相同
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（4）用消毒镊子夹取灭菌的圆形滤纸片（）投入不同浓度药液中，1分钟后取出，放入含真菌孢子的　　培养基上，每皿放6片（5个浓度各1片，另1片为对照片），恒温培养一定时间，测抑菌圏直径。
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各滤纸片间距要适合，以防形成的抑菌圈不园
放滤纸片时要平放、更迅速、准确、放下后不能再移动
用十字交叉法测量抑菌圈的直径
注意事项
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用灭菌后的打孔器直接在凝固好的含孢培养基上打成圆孔，将定量的药液滴入圆孔中，恒温培后测量抑菌圏的大小，进行杀菌剂毒力比较。
孔碟法
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主要有以下几个方面的
1　对供试菌的要求　在较粗放的比较杀菌剂毒力的测定中，对菌种的要求不必过严，只要在培养基中容易培养而且抑菌圈清楚的均可采用。
影响抑菌圈法测定结果的因素
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特别是为某一特定病害寻求有效的防治药剂时，实际上不可能对供试菌进行选择，但以水平扩散法作生物定量测定，如抗菌素效价测定，则必须对供试菌有如下的要求：
对被测定的药剂有适当的敏感性，抑菌圈界限明显
培养容易，生长迅速不易为杂菌污染　不易发生变异
容易作成接种菌液（菌丝体或孢子悬浮液）
菌种有较强的耐热能力
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2　对药剂的要求　
　用抑菌圈法测定一种药剂的抑菌作用的大小，有一定的局限性。如与该药剂的理化性质有密切的关系。如是否容易扩散。若有很好的扩散性能，就能真实反映该药剂的杀菌毒力。如由于大多数抗生素都有一定的水溶性，因此，抑菌圈法为抗生素的科研和生产广泛采用。而有相当一部分杀菌剂的原药是