文档介绍：质粒抽提ppt
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★质粒的重要性
质粒是宿主细胞引入外源基因的主要方法!
质粒是下游生物技术(如蛋白表达,药物筛选,细胞和组织研究)的基础!质粒的结构影响下游实验的成功率,特别是涉及到in。
，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉。
70%乙醇洗涤沉淀物1次，离心12000 rpm ， 5min。
，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。
TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存备用。
。
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酚和***仿的各自作用
酚（Phenol）对蛋白质的变性作用远大于***仿，按道理应该用酚来最大程度将蛋白质抽提掉，但是水饱和酚的比重略比水重，碰到高浓度的盐溶液，离心后酚相会跑到上层，不利于含质粒的水相的回收；但加入***仿后可以增加比重，使得酚/***仿始终在下层，方便水相的回收；还有一点，酚与水有很大的互溶性，如果单独用酚抽提后会有大量的酚溶解到水相中，而酚会抑制很多酶反应（比如限制性酶切反应），因此如果单独用酚抽提后一定要用***仿抽提一次将水相中的酚去除，而用酚/***仿的混合液进行抽提，跑到水相中的酚则少得多，微量的酚在乙醇沉淀时就会被除干净而不必担心酶切等反应不能正常进行。至于异戊醇的添加，其作用主要是为了让离心后上下层的界面更加清晰，也方便了水相的回收!
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乙醇沉淀DNA
回收后的水相含有足够多的盐，因此只要加入2倍体积的乙醇，在室温放置几分钟后离心就可以将质粒DNA沉淀出来。
乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。 DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。
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●煮沸法快速提取质粒
主要溶剂
（1） STET 缓冲液（ ）（ 8% 蔗糖， %Triton, 50mmol/L EDTA,,10mmol/L Tris ）
（2） 5%CTAB （十六烷基三***溴化氨）
（3）溶菌酶（ 50mg/ml ，溶于 10mmol/L Tris-HCl ， pH ）
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主要步骤:
（1） 弃上清液，用滤纸吸干离心管中的液体培养基，将细菌沉淀物悬浮于 200 m l STET 缓冲液，用涡旋混合器充分混匀。 （2） 加入 4 m l 新鲜配制的溶菌酶液，混匀，置室温下 5min 。 （3） 用漂子架住离心管，置于沸水浴中，精确记时 45 秒，取出后立刻离心 10min 。 （4） 用无菌牙签挑取离心管中的沉淀物弃去，离心管的上清液中加入 8 m l 5%CTAB ，用混合器混匀后，高速离心 5min ，弃上清液，用滤纸吸干离心管中的液体。
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主要步骤:
（7） 加入 ***化钠 300 m l ，充分溶解沉淀物，再加入 750 m l 的冷乙醇，充分混匀后，离心 15min ，弃上清液。 （8） 取 1ml 70% 冷乙醇，缓慢淋洗离心管内壁，离心 5min 。弃上清液，用滤纸吸干管壁上的液体，置室温中使核酸沉淀自然干燥 5-10min 。 （ 9 ） 沉淀物溶于 50 m l TE 缓冲液中， 混合器混匀 。 （10） 即成质粒制备液
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煮沸法与碱裂解法比较
煮沸法最大的优点就是不会使基因组DNA发生断裂,抽出来的质粒带型比碱裂解法抽出来的单一
碱裂解法作用剧烈对蛋白处理比较彻底,操作简单
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质粒的检测
判断质粒抽提好坏的标准:
：采用生物分光光度计检测260nm、280nm波长吸光值，若吸光值260nm/－，说明质粒质量较好，，，。
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质粒的检测
:标准质粒电泳检测图应该有三条
带:跑最快的是超螺旋，质粒是超螺旋的，电泳的时候最亮很正常；中间的是开环质粒（由于在提取质粒中物理机械力把质粒打断了）；最后是质粒的复制中间体（即没有完全复制的2个质粒连在一起）。
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质粒的大量制备
Anion-exc