文档介绍：王芳-毕业论文
石河子大学本科毕业论文王芳海岛棉GbMFT2基因在烟草中的遗传转化
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石河子大学本科毕业论文王芳海岛棉GbMFT2基因在烟草中的遗传花的控制功能外，FT-like和TFL1-like还涉及到很多不同功能，如马铃薯块茎的形成、茎的伸长、杨树芽的休眠、顶端分生组织生长前的衰减[9]等。相对于FT-like和TFL1-like基因，MFT-like 基因的研究仍然很有限。进化分析认为MFT是植物PEBP家族基因的祖先[10]。MFT基因也具有促进开花的作用，但失去功能的mft突变体在正常生长条件下没有明显的表型[9]。ABA和GA是种子适应外界环境的生物和非生物胁迫调节种子发芽的2个重要的拮抗激素，近年来的研究表明，MFT参与了ABA和GA信号通道在种子发芽过程中起着重要的调节作用[11]。拟南芥MFT在种子萌发过程中的胚根和下胚轴的转变区特异表达，MFT的转录分别受到ABA信号通道中的2个关键的转录因子ABA-INSENSITIVE3(ABI3)和ABI5的调节，并且DELLA蛋白RGA-LIKE2 (RGL2)可以明显地促进MFT的转录。Hedman等[10]研究发现被子植物MFT-like含有两个亚家族：A亚家族和B亚家族，A亚家族在双子叶植物和单子叶禾本科植物都存在，B亚家族仅在双子叶植物中存在，在MFT-like基因的进化过程中其中一类MFT-like基因发生了丢失，而A亚家族基因一般羧基末端都含有保守的脯氨酸残基Pro，B亚家族基因一般都含有保守的谷氨酸残基Glu。
棉花是重要的经济作物，开花早晚和产量、品质性状之间存在显著相关，并且影响霜前皮棉产量、纤维长度等。相对于拟南芥和水稻等植物，棉花的PEBP基因家族的功能研究报道较少。东锐等[12]从陆地棉中克隆了一个FT-like基因GhFTL1，该基因具有FT-like基因的结构，且在拟南芥中过量表达，长日照下明显的促进早花。顾超等[13]从棉花中克隆得到了一个MFT类似基因并命名为GbMFT1，用不同浓度的ABA处理棉花种子发现
石河子大学本科毕业论文王芳海岛棉GbMFT2基因在烟草中的遗传转化
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GbMFT1基因的表达不受ABA的调节。本研究从海岛棉中克隆得到了一个MFT类似基因并命名为GbMFT2，对棉花种子用不同浓度ABA胁迫，分析GbMFT2的表达情况，发现GbMFT1基因的表达受ABA的调节，此外，将过表达载体p35S:GbMFT2叶盘法转入烟草，统计转基因烟草与野生型烟草的开花时间，并且进一步探索该基因的功能，对T2代转基因烟草进行盐胁迫处理，对其耐盐性进行分析，为进一步完善棉花PEBP基因家族的功能奠定了基础。
1．材料与方法

植物材料
普通烟草（Nicotiana tabacum）为本实验室保存。
菌种、载体及试剂
含有重组质粒p35S:GbMFT2的甘油农杆菌为本实验室保存；Tris Base、EDTA、CTAB等生化试剂，均购自上海生工生物工程有限公司；10×Ex Taq Buffer、 mmol/L dNTP Mixture、rTaq酶、5 × Prime Script Buffer、RNase Inhibitor、PrimeScript Transcriptase均购自TaKaRa公司；Trizol试剂盒购自invitrogen公司；DNA分子量Marker购自东盛公司;所用引物均由北京华大基因有限公司合成。
培养基
LB固体/液体培养基：胰蛋白胨（Tryptone） 10 g/L；酵母提取物（Yeast extract）：5 g/L；***化钠（NaCl）10 g/L，若配制LB固体培养基需加入15 g/L琼脂粉（Agar A）。若配制LB（Kan+Rif）双抗培养基，则需加入经过过滤灭菌的卡那霉素（Kan）和利福平（Rif）母液，使其工作浓度分别为50 mg/L、25 mg/L。
1/2MS培养基：蔗糖（Sucrose） g/L；MS（Murashige & Skoog Medium） g/L；MES g/L；琼脂（Agar A） g/L。
MS培养基：蔗糖（Sucrose） g/L；MS（Murashige & Skoog Medium） g/L；MES g/L；琼脂（Agar A） g/L。
烟草培养基：基本培养基MS（Murashige 和Skoog 1962），附加不同浓度的植物激素和抗生素，蔗糖含量为3%，%，pH 。