文档介绍：1目的
菌种保藏使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。规范菌种原始菌液的制备及长期保存。
2内容
定义
原始菌液--由冻干菌或冷冻菌直接传代的抱子或生长菌的原始悬浮液。
工作菌液--由原始菌液直接1目的
菌种保藏使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。规范菌种原始菌液的制备及长期保存。
2内容
定义
原始菌液--由冻干菌或冷冻菌直接传代的抱子或生长菌的原始悬浮液。
工作菌液--由原始菌液直接稀释，或根据一般试验需要而等量稀释的特定浓度的抱子或细菌的悬浮液。
总则
微生物室收到实验菌种后应进行活化及纯化，并进行传代（芽抱杆菌除外）。
每一新菌种在适宜的琼脂平板上划线分离，检查是否纯种，观察菌落形态并用革兰氏染色或
芽抱染色法进行镜检，如果是芽抱悬浮液，用常规方法测定其存活抱子数。
经检查如果满意，贴上合适的标签，并将贮备菌存放在实验室专用的冰箱里
（2〜8C）或冷冻室内，以避免与实验室正在使用的其它菌种相混淆，作好菌种传代的记录以便能追踪传代史。
生抱梭菌的胞子悬浮菌应每年制备一次。
原始菌种的传代次数最多传至第五代。
1口乔酉占
冻干菌制备原始菌液
由甘油冷冻菌制备原始菌液
把冻干菌加入100ml液体培养基后所得的菌作为第一代。
从冷冻箱内取出冷冻菌，使其在室温下慢慢融化；
把冷冻菌无菌转移至 100ml该菌所适用的液体培养基中；
根据菌种的类型，将接种后的培养基在适当温度下培养24h或更长一些时
间；
把甘油冷冻菌加入100ml液体培养基后所得的菌作为第二代。
由集菌平板制备原始菌液
在超净工作台内，把经过24h （或更长时间）培养的菌液摇匀，各取1ml,
无菌转移至5只培养基平板上，轻轻转动平板，使菌液均匀分布于平板表面。不同培养基适
用于不同菌种。
另用一只平板，划线分离菌液，培养之，以检查菌液是否纯种。
在适当的温度下培养以上平板，不同菌种所需培养周期不一。
生长菌-24h以内即可显见增长;
抱子-需要3〜7天或更长时间才能得到 50%包子，这样可确保提到浓的
悬浮液。对需长时间培养或培养温度较高（55C）的平板进行适当密封，以免培养基失水干
裂。
分生抱子，一般需要5〜14天才能获得明显的分生抱子生长物，将平板
封口，以免分生池子污染空气。
在超净工作台内，各取约 ***化钠磷酸缓冲液（PBS加至经培养后的集菌平板内。
用弯曲的接种棒（或无菌玻璃弯头）轻轻地刮平板表面，使菌落与平板分
离。但注意不要划破培养基。倾斜平板，使菌悬液集中于平板一端，用无菌注射器或无菌吸
管吸取菌悬液，把 5只平板中的菌悬液收集于一只大小合适，便于封口的试管中。
标记
在原始菌液的标签上记述下列内容：
菌种名称
原始菌种制备编号（代数 +制备日期）
有效期（抱子悬浮液的有效期为一年）
操作者姓名
菌液浓度一经标定后，即应补记在标签上。
原始菌液的浓度标定
标定抱子初始制备液的浓度并进行记录，以后，每次使用该原始菌液时，
不论直接使用或用其配制工作菌液，都应事先重新标定其浓度。前一次标定浓度仅供参考；
除非有定量要求，一般生长态菌的原始菌液无需标定，生长菌很易死亡，因此不能保持稳定