文档介绍：临床基因扩增检验实验室规范化设置及其管理
临床基因扩增检验实验室规范化设置及其管理
临床基因扩增检验实验室规范化设置及其管理
临床基因扩增查验实验室的规范化设置及其管理
使基因扩增查验技术有效地应用于临床，更好地为疾病的预防、诊疗和的核酸提取方法，可在展开临床标本检测前对提取方法进行评论。用于RNA扩增检测样本制备好此后，应立刻进行cDNA合成，因为cDNA链较RNA稳定，保留相对容易。为保证逆转录反响的需要，应在标本制备区设置一个以上的温育装置。cDNA合成的理想温度依所使用的酶而定，倾向于使用一步法：即便用在扩增反响缓冲液条件下拥有逆转录活性的热稳定的DNA聚合酶进行逆转录，其较cDNA合成后再开盖以调节缓冲液或加入聚合酶进行扩增发生污染的可能性降低。待测RNA的cDNA拷贝须保留在标本制备区，不得在本区对样本进行PCR扩增。
临床基因扩增检验实验室规范化设置及其管理
临床基因扩增检验实验室规范化设置及其管理
临床基因扩增检验实验室规范化设置及其管理
(三)扩增区
临床基因扩增检验实验室规范化设置及其管理
临床基因扩增检验实验室规范化设置及其管理
临床基因扩增检验实验室规范化设置及其管理
下述工作在本区内进行：DNA或cDNA扩增。别的，已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反响混杂液(来自试剂贮存和制备区)制备成反响混杂液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中，往常在第一轮扩增后必须翻开反响管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。不能从本区再进入任何"上游"地区，可降低本区的气压以防止气溶胶从本区漏出。为防止气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的走动。如有加样则应在超净台内进行。翻开预办理过的反响混杂液时必须防备液体溅出，尤其是在巢式扩增步骤之间。一个简单的方法是在翻开反响管前迅速离心数秒。可使用体积较小的离心计，因其所占实验台面小，易于用一只手操作，适合于大多半超净台。防潮屏障如石蜡油或轻矿物油也拥有防污染作用，但必须注意的是，矿物油本身也可能成为一种持续性的污染源。用过的加样器必须注意清洁消毒。达成操作及每日工作后都必须对实验室台面进行清洁和消毒，紫外照射方法与前面地区相同。如有溶液溅出，必须办理并作出记录。(四)扩增产物剖析区下述操作在本区内进行：扩增片段的测定。
核酸扩增后产物的剖析方法多种多样，如膜上或微孔板上探针杂交方法
(同位素标记或非同
位素标记)、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰***凝胶电泳、
Southern转移、核酸测序方法等。目
前国内的商品试剂盒绝大多半均采用非同位素标记的微孔板上探针杂交方法，即
PCR-ELISA
方法，也有膜上探针杂交方法。
本区是最主要的扩增产物污染根源，
因此必须注意防止经过本区的物品及工作服将扩增产物
带出。在使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时，必须使用洗板机洗板，废液必须收集至
1m
ol/LHC1中，并且不能在实验室内倾倒，而应至远离
PCR实验室的地方弃掉。用过的吸头
也必须放至1mol/LHCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序办理，如燃烧。
由于本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、
丙烯酰***、甲醛或同位素
等，故应注意实验人员的安全防备。