文档介绍：第十一章生物素-亲和素放大技术
第一节生物素的理化性质与标记
一、活化生物素
利用生物素的竣基加以化学修饰可制成各种活性基团的衍生物,称为活化生物素。
（一）标记蛋白质氨基的活化生物素
将生物素与N-羟基丁二酰***在碳二亚***的彳用第十一章生物素-亲和素放大技术
第一节生物素的理化性质与标记
一、活化生物素
利用生物素的竣基加以化学修饰可制成各种活性基团的衍生物,称为活化生物素。
（一）标记蛋白质氨基的活化生物素
将生物素与N-羟基丁二酰***在碳二亚***的彳用下进行缩和，生成BLAHS BLAH汕的-C=0基团与蛋白
质分子中赖氨酸的氨基形成肽键，从而标记上生物素。
（二）标记蛋白质醛基的活化生物素有两种:生物素酰。（BHZ；用于偏酸性糖蛋白的生物素标记）和
肿化生物胞素（BGHZ 。
（三）标记蛋白质 ♦基的活化生物素:3- （N-马来酰亚***-丙酰）-生物胞素（MPB是能特异地与蛋白质疏基结合的活化生物素试剂。
（四）标记核酸的活化生物素：生物素戊酸侧链通过酰***键与核酸分子相连，构成生物素标记的核酸探针。
.光敏生物素：用于 DNA或RNA勺标记。
.生物素脱氧核昔三磷酸：将生物素与某种脱氧核甘酸连接成活化生物素。用缺口移位法掺入到双链 DNA 中。
.BNHS和BHZ与核酸胞喀咤分子中的 N-4氨基交联，使核酸分子生物素化。
二、生物素标记蛋白质
（一）生物素化蛋白质衍生物的特性
生物素通过竣基与多种大分子偶联活化。一个蛋白质分子可连接多个生物素分子，在与亲和素的反应
中成为多价。
生物素化蛋白质衍生物有两类，一种是生物素化的大分子活性物质（如抗原、抗体），另一种是标记
材料（如酶）结合生物素后制成的标记物。
（二）标记方法
.标记抗体、抗原：由于一个抗体分子可连接多个生物素分子，因此一个生物素化的抗体分子在反应时可与多个亲和素分子结合。通常选用第二抗体进行生物素标记，制备的标记物具有通用性。
.标记酶：如生物素标记辣根过氧化物酶（ HRP 。
（三）标记注意事项
.应根据抗原或抗体分子结构中所带可标记基团的种类（氨基、醛基或疏基）以及分子的理化性质（酸
性、中性或碱性），选择相应的活化生物素和反应条件。
.标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例，使每个蛋白质分子上标记的生物素分子数量控制在一定范围，以免影响标记物的活性。
.为减少生物素标记蛋白质后，大分子物质造成的空间位阻影响，有利于生物素与亲和素的结合，可在生物素与被标记物间加入交联臂样结构。
.生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性；标记酶时则结果有不同。
第二节亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记
亲和素和链霉亲和素是大分子蛋白，几乎可以和任何用于标记的物质结合。
一、亲和素及其活性
亲和素（AV）耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用，尤其是与生物素结合后，稳定性更好。每个亲和素能结合4个分子的生物素，二者之间的亲和力极强。
二、链霉亲和素及其活性
链霉亲和素（SAA分子中每条肽链都能结合一个生物素，因此一个链霉亲和素分子也能结合4个生物
素分子。
三、亲和素（或链霉亲和素）的标记
用于标记亲和素或链霉亲和素的小分子示踪物有1251、胶体金、荧光素和化学发光物，大分子物质