文档介绍：实验报告
一．实验目的
质粒提取即将质粒与细菌基因组 DNA 分开，去除蛋白质及其它
杂质，以得到相对纯净的质粒。本次实验的目的主要是获得相对
纯净的植物表达载体质粒 E1-PU实验报告
一．实验目的
质粒提取即将质粒与细菌基因组 DNA 分开，去除蛋白质及其它
杂质，以得到相对纯净的质粒。本次实验的目的主要是获得相对
纯净的植物表达载体质粒 E1-PUC18
二．实验内容

三．实验原理
P1（重悬菌体，提供缓冲环境）
主要成分是 50 mmol/L 葡萄糖，25 mM/L Tris-HCl，10 mM/L
EDTA，
主要作用：悬浮菌体
葡萄糖增稠，使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到离心管的底
部；EDTA 抑制 DNase 的活性，
P2（氢氧化钠和 SDS 裂解菌体细胞壁、在细胞膜上穿孔，
释放细胞内的质粒）
主要成分是的 NaOH ，1% SDS
主要作用是破坏细胞壁和细胞膜，使细胞的内容物释放
其中 NaOH 主要是为了溶解细胞，释放 DNA，因为在强碱性的情况下，细胞膜发生了从双层膜结构向微囊结构的变化。SDS 与
NaOH 联用，其目的是为了增强 NaOH 的强碱性，同时 SDS 作
为阴离子表面活性剂破坏脂双层膜。
注意事项：第一，时间不能过长，因为在这样的碱性条件下基因
组 DNA 片断也会慢慢断裂；第二，必须温柔混合，不然基因组
DNA 会断裂。破细胞的主要是碱，而不是 SDS，所以称为碱法
抽提。
P3（中和氢氧化钠、SDS 中的钠被钾替换，吸附菌体产
生沉淀）
主要成分是 3mol/L 的醋酸钾，2mol/L 醋酸，75%酒精
主要作用是沉淀蛋白和中和反应
其中醋酸钾是为了使钾离子置换 SDS 中的钠离子而形成了 PDS，
因为十二烷基硫酸钠（sodium dodecylsulfate，SDS）遇到钾离子
后变成了十二烷基硫酸钾（potassium dodecylsulfate, PDS），而
PDS 是不溶水的，同时一个 SDS 分子平均结合两个氨基酸，钾
钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了。
2 mol/L 的醋酸是为了中和 NaOH。基因组 DNA 一旦发生断裂，
只要是 50~100 kb 大小的片断，就没有办法再被 PDS 共沉淀了，
所以碱处理的时间要短，而且不得激烈振荡，不然最后得到的质
粒上总会有大量的基因组 DNA 混入，