文档介绍：-1- 高二生物选修 3 知识点自我检查与总结归纳专题 1 基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外 DNA 重组和转基因技术,赋予生物以新的遗传特性, 创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在 D NA 分子水平上进行设计和施工的,又叫做 DNA 重组技术。(一)基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶) (1 )主要是从原核生物中分离纯化出来的。(2) 功能: 能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列, 并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。(3 )结果:经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式: 黏性末端和平末端。 2.“分子缝合针”—— DNA 连接酶(1) 两种 DNA 连接酶( E· coliDNA 连接酶和 T 4- DNA 连接酶)的比较: ①相同点:都缝合磷酸二酯键。②区别: E· coliDNA 连接酶来源于 T 4 噬菌体,只能将双链 DNA 片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T 4 DNA 连接酶能缝合两种末端, 但连接平末端的之间的效率较低。(2) 与 DNA 聚合酶作用的异同: ? ? ???????????????????? DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。 DNA 连接酶是连接两个 DNA 片段的末端,形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——载体(1 )载体具备的条件: ①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点,供外源 DNA 片段插入。③具有标记基因,供重组 DNA 的鉴定和选择。(2 )最常用的载体是? ?质粒, 它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链环状 DNA 分子。(3 )其它载体: 噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步: 目的基因的获取 1. 目的基因是指: 编码蛋白质的结构基因。 2. 原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。 技术扩增目的基因(1 )原理: DNA 双链复制(2) 过程: 第一步: 加热至 90~ 95℃ DNA 解链; 第二步: 冷却到 55~ 60℃,