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文档介绍：分光光度法
南方医科大学
生物化学与分子生物学实验教学中心
内容
3
分光光度法的原理
1
如何求被测组分的含量
2
分光光度计的基本结构
分光光度计的使用与注意事项
4
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分光光度法
概念:是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术。
特点:灵敏度高、精确度高、操作简便、快速。对于复杂的组分系统,无须分离即可检测出其中所含的微量组分的特点。
分光光度法分类
紫外分光光度法(200~400nm)
可见分光光度法(400~760nm)
红外分光光度法(760~10000nm)
分光光度法的原理-1
Lambert-Beer定律
即:I0=IA+IR+IT(所用比色皿同质料同规格,反射光强度为一定值)

故:I0 =IA+ IT
I0
IT
入射光强度
透过光强度
L
C
液层厚度
溶液浓度
IA
反射光强度IR
吸收光强度
分光光度法的原理-2
由式中可知:当入射光强度I0为一定时,被吸收光强度IA愈大,则透过光强度IT愈小。即透过光强度减弱仅与有色溶液对光线的吸收有关。
实验证明:溶液质量浓度C愈大,深层厚度L愈厚,则溶液对光线吸收得愈多。
分光光度法的原理-3
它们之间的关系是:
分光光度法的原理-4
分光光度法的原理-5
如何求被测组分的含量