文档介绍：生物大实验三《微生物学》部分实验目录
实验一、培养基的配制和灭菌
实验二、微生物的分离、接种及培养法
实验三、水中细菌总数和大肠菌群的检测
实验四、微生物的快速鉴定和自动化分析技术
实验五、抗微生物药物敏感性试验
实验六、微生物些事项？
.管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？为什么？
六、实验报告
实验二、微生物的分离、接种及培养法
一、目的要求
.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。
.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。
二、实验原理
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生
物的分离与纯化。常用的分离方法有： 1）平板划线分离法；2）稀释平板分离法。
在食品发酵工业中，通过微生物的分离、纯化，选育优良的微生物菌种，以
提高产品的质量和产量；在食品卫生管理方面，需要进行微生物检测，必须将微
生物单一分离出来，加以鉴别和研究。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰
富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价
值的菌株。
微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作。
三、实验材料
.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样
品。
.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼
脂培养基（斜面、平板）。
.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。
四、实验内容与步骤
（一）微生物的分离技术
.平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个
菌落，从而达到分离的目的。具体方法如下：
倒制平板-制备含菌样品稀释液-划线-倒置适温培养-观察记录
1）倒制平板：将固体培养基熔化-冷却至50-55Cf注入培养皿内15ml （无菌操
作）-旋匀-静置凝固-即成平板-在皿盖边贴标。
2）含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌
悬液即可，能直接划线的样品（如体液、黏液、污水等），可省去这操作。
3）划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸
入培养皿，轻轻划线（切勿把平板表面划破）。然后将培养皿倒置放入恒温培养
箱 37℃，培养24-48 小时，观察平板上出现的现象，注意菌落的形状，并做记
录
微生物平板划线分离
平板划线分高法
.稀释平板分离法：采用稀释手段，使样品分散到最低限度，然后吸取一定量注入平皿内，倒入培养基，摇匀静置凝固后培养，这样被分离的细菌被固定在原处而形成菌落，可作为一种计数方法。
1）制备土壤稀释液：（细菌的分离）以无菌操作，称取样品 10g,加入装有90ml 无菌水的锥形瓶中，振荡10-20分钟，使土样与水充分混合，即成 10-1 土壤稀释液，然后在酒精灯火焰旁，用无菌移液管吸取1ml10-1的稀释液注入9ml无菌水的试管内，制成10-2的稀释液。用同样方法再制成10—3, 10—4, 10—5, 10-6的稀释液。
稀释完毕后，可用原来的移7管，从菌液浓度最小的 10—6的稀释液开始吸取1ml 的10-6稀释液，加到相应编号10-6的无菌培养皿内，以相同方法分别吸取 1ml 的10-5、10-4的稀释液加到相应编号为10-5、10-4的无菌培养皿内。
注意：①每稀释一个浓度，必须更换一支无菌吸管。②用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用10-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10 -4稀释度。
样液的确料固体培养基分离纯培养
2）平板的制作：将固体培养基融化，待冷却至45-50C左右，分别倾入已盛有10-4、 10—5、10-6稀释液的无菌培养皿内，轻轻摇匀，静置凝固。凝固后将平板倒置于 37。叵温箱中，培养24-48小时，细菌即在所固定的位置长成肉眼能见的菌落。
（二）微生物的接种方法
将有菌的材料或纯粹的菌种转移到另一无菌的培养基上，这个过程就称为接种。
常用的接种方法如下：
.斜面接种：从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。
左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，灭菌后，接种。此法用于好气性微生物的接种。
.液体接种：由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方