文档介绍：土壤与环境微生物研究法/李振高，骆永明，：科学出版社，2008 过氧化氢酶（398-399）服酶（404-405）磷酸酶（412-413）
关松荫/土壤酶及其研究法农业出版社1986年七月第一版蔗糖酶274-276
土壤4）=m/ （V1-V2） *
式中 c （l/5KMnO4）=一高镒酸钾标准液之物质的量浓度，mol/L；
m——草酸钠之质量，g；
Vi——高镒酸钾溶液之用量，mL；
V2——空白试验用高镒酸钾溶液之用量，mL；
—— （l/5KMnO4）= 钠的质量。
土壤磷酸酶测定方法：磷酸苯二钠法
磷酸酶（phosphatase）能酶促有机磷化合物的水解。试验表明，土壤微生物对于土壤含磷有机物的矿化起着主要的作用；某些高等植物的根系也有磷酸酶活性。土壤的磷酸酶活性可以表征土壤的肥力状况（特别是磷的状况）。
（-）基本原理
土壤磷酸酶活性的测定常用各种磷酸酯作为基质。应用得最多的是酚猷磷酸酯、苯磷酸酯、甘油磷酸酯、a或［3 -蔡磷酸酯和P -硝基苯磷酸酯等的水溶性钠盐。当它们被酶促水解时，能析出无机磷和基质的有机基团。因此磷酸酶活性的测定是测定基质水解后的无机磷或酚的部分。这里介绍的方法是测定基质水解时生成的酚量。该法可用于测定各种磷酸酶的活性：碱性磷酸酶（用pH 10的硼酸盐缓冲液），中性磷酸酶（用pH ），酸性磷酸酶（用pH ）o
（二）实验试剂
酶促反应试剂
1）甲苯。
2）苯磷酸二钠溶液：（C6H5P04Na2 - 2H20）溶于水，并稀释至 lOOOmL （ImL 含 25mg 酚）。
3）乙酸盐缓冲液（pH ）：称取136g乙酸钠（C2H302Na）溶于700mL去离子水，用乙酸调 ,用去离子水稀释至lOOOmLo
4）柠檬酸盐缓冲液（pH 7. 0）:称取300g柠檬酸钾（C6H5O7K3）溶于700mL去离子水，用稀盐酸调节至pH7. 0,用去离子水稀释至lOOOmLo
5）硼酸盐缓冲液（pH ）：（H3B03）溶于700ml）去离子水，用稀NaOH溶液调节至pH ,用去离子水稀释至lOOOmL
测定试剂
1） Gibbs试剂：将200mg2, 6-双漠苯醍***酰亚***（C6H2BrCINO）溶于乙醇，并稀释至 lOOmLo
2）标准溶液：（a）母液：1g酚溶于蒸馅水中，并稀释至1000ml_,溶液保存在暗色瓶中；（b）工作液：10mL溶液（a）稀释至lOOOmL （ImL含lOpig酚）。
（三）操作步骤
1）取10g过1mm筛的风干土样置于lOOmL容量瓶中，（泥炭土用5 ml_ 甲苯）。
2）处理15rnin后，注入10mL苯磷酸二钠溶液和10mL相应的缓冲液（根据磷酸酶的性质确定）。
3）将反应混合物置于37°C恒温箱中，培养3h后（若不显色或显色不明显，则时间可增至 24h）,用38°C的热水将瓶中内容物稀释至刻度（甲苯应浮在刻度以上），再用致密滤纸过滤。
4