文档介绍：实验三细胞组分的分离和鉴定目的: 了解用细胞匀浆和差速离心的方法分级分离细胞组分的原理及过程; 熟悉离心机、匀浆器的使用方法原理: 细胞内各种结构的比重和大小都不相同,在同一离心场内的沉降速度也不相同,据此,可用不同的转速离心分离, 使细胞内各种碎片和细胞器分级分离出来。分为:匀浆、分级分离、分析三个步骤 : 破坏细胞;根据材料性质不同,放到不同的匀浆溶液中,在匀浆器中研磨,细胞被机械地碾碎成为匀浆。 : 把细胞匀浆放入在一定液体(介质)环境中,在离心机中使用不同转速离心分离处理。由于离心力的作用,细胞内各种碎片和细胞器被分级分离出来。(1) 差速离心法: 是指由低速到高速分级分离的一种方法。先低速沉淀较大颗粒如细胞核,再高速沉淀原先悬浮在上清液中的较小颗粒。(2) 密度梯度离心法: 采用密度具有梯度的介质,使介质分为不同层次,由上到下密度依次增大,细胞匀浆安置在离心管最上层,离心, 大小、形态、密度不同的颗粒(细胞器)由于沉降系数不同,以不同的速度向管下移动,集中在不同的区域。 3. 分析: 用细胞化学法对分离出来的细胞组分作形态和生化鉴定步骤:处死取肝洗净吸干剪碎(+ 2ml 蔗糖)匀浆过滤(+到 6ml 蔗糖) 制片 1#配平离心( 2800 转8分) 沉淀 上清液 加到 6ml 蔗糖、混匀制片 2# 配平、离心 移入高速离心管、预冷 2800 转8分对称、离心 12000 转 10 分弃上清、加少量蔗糖制悬液弃上清、留沉淀、加少量蔗糖悬浮先加一半混匀,再加满 制片 3# 配平、预冷、离心 12000 转 10 分上清制片 4、沉淀制片 5 1、2、3片凉干,乙醇固定(5分),甲-派染色(20分) 4、5片詹纳斯绿染色(2-3分) 结果观察: 1号片 3号片 5号片实验报告: 预期结果实际结果 1号片 2号片 3号片 4号片 5号片