QPCR原理.docx

文档介绍：兼顾速度与可靠性EppendorfPCR系统
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20YearsofPCR
PCR只是一个概念，所发生的确?
平台期DNA拷贝数波动很大，CT值却是相对固定的。
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定量分析原理
QuuausalonE
AmplificationPlot
Yct=X-(1+E)n=2nX
Ect=l
—Threshold
^BackgroundFluorescence
Cycle#
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CT值的定义是PCR扩增过程中，荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的拐点所对应的循环次数。
CT值与起始模板浓度成负相关关系，不同CT值的模板起始浓度相差2"倍,n为CT间差值
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为什么Ct值oc起始DNA浓度?
Rn=Rb+X。(1+e)11Rs
当循环次数n=CT值时：
RCT=RB+X0(l+e)CTRs
lg(Rct■Rb)=IgXo+CTlg(1+e)+lgRs
CTlg(1+e)=・lgXo+lg(Rct-Rb)一也Rs
C_logX。|log(/^_/?£)_log/?s丫log(l+Ex)log(l+Ex)
BPCT=-klgX0+b(线性方程)eppendorf
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定量PCR的实质
模板定量
找到PCR的指数增长期
定量数据归一化
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科研的主要工具
•mRNA与基因表达的研究
•DNA拷贝数的检测
•单核昔酸多态性(SNPs)的测定
•DNA芯片结果认证
医学方面应用前景更是令人鼓舞
•极微量的基因表达定量•病原体检测
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绝对定量

1
1000
02468101214161820222426283032343638404244
CycleNumber
5050
2211⑥Au-o
403530
Threshold
CNoiseband
CBestR^2
C*Manually
[289T
Baselinesettings-eAutomaticbaseline：
CManualbaseline
Cyclerange
厂Driftcorrection
StandardCurve

Y-□ficie©

**********.OE-++++++-10
Amount[Copies：]
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FileEditGraphNormaliseHelp
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b-actin1Q