文档介绍：微生物实验指导
实验一微生物培养基的配制和灭菌
培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件：(1)适当组分和比例的营养物质；(2)适宜的上标签，灭菌备用。
（2）．马铃薯(或豆芽汁)蔗糖(或葡萄糖)琼脂培养基。(用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养基)。
配方：去皮马铃薯(或鲜豆芽) 200克
蔗糖(或葡萄糖) 20克
自来水 1000毫升
琼脂 20克
pH 自然
灭菌：(含蔗糖)15磅／英寸2 30分钟。
(含葡萄糖)10磅／英寸220分钟。
制备方法：配制200毫升培养基。
取去皮马铃薯40克，切成小块，放入无刻度的搪瓷杯中，加水200毫升，置电炉上加热，煮沸十分钟，用四层纱布过滤至具刻度的搪瓷杯中，滤液加水补足至200毫升，然后加蔗糖4克，加琼脂4克，加热熔化，并用玻棒不断搅拌，直至琼脂完全熔化，分装试管，下面一系例步骤同配细菌培养基相同。
（3）淀粉琼脂培养基(高氏一号Gause’S1)，用于分离和培养放线菌之用，是一种合成培养基。
配方：可溶性淀粉
KN03
K2HP04
MgS04·7H20
NaCl
FeS04·7H20，
琼脂 20克
自来水 1000毫升
灭菌：15磅／英寸2，30分钟。
制备方法：配制200毫升培养基
吸取配方液：1％ KN03 20毫升；l％ K2HP04 lO毫升；l％ MgSO4·7H2O lO毫升；l％NaCl 10毫升；1％FeSO4·7H2O ，加水补足至200毫升，置电炉上加热。用另一只搪瓷杯称取可溶性淀粉4克，从200毫升中取出少量加入淀粉中，用玻棒调成糊状，待液体沸腾后，将淀粉糊洗入培养液中，搅匀，，加琼脂4克，加热至琼脂完全熔化为止，趁热分装试管，下面一系例步骤同于配制细菌培养基的操作方法。
（4）．无菌水的制备：
无菌水，为下一次微生物分离实验中所需用的材料。
100毫升三角瓶(装有玻璃珠)，装自来水45毫升，试管中装9毫升自来水，塞上棉塞，包扎、灭菌备用。三角瓶和试管须预先塞好棉塞，并经干热灭菌。
(二)分离培养微生物常用器皿的准备
1．清洗一些玻璃仪器：如三角瓶，试管，培养皿、吸管等。
2．棉塞的制作：装培养基和分离培养需用的部分玻璃器皿，需加棉花塞。棉塞的作用为过
滤空气，使试管内外空气可以流通，但外界空气中杂菌不能进入，避免污染。试管、三角瓶都要做棉塞。吸管上部也要塞入棉花，在管口约l～2毫米处，用解剖针塞入少许棉花，(约1—)，以防止细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹入管内。棉花要塞得松紧适宜。吹时以能通气但不使棉花滑下为准。
教师示范做试管棉塞，同学每人做5支试管棉塞。棉塞要求不紧不松，两头光滑，试管棉塞的长度约3厘米左右。塞入试管内部分约占2／3，头部稍大约占l/3左右，见图3—4。
1 2 3 4 5 .
图3-4 棉塞的要求条件
，管外太松 5. 管内部太紧，管外太松
3．包装培养皿和吸管等。为了使培养皿、吸管，三角玻棒等洗净，干热灭菌后，不让表面暴露，以保证无菌状态
，为此干热灭菌前先用旧报纸包装妥当(见示范)，每组同学包培养皿6只(一包)。
吸管的包装，将塞好棉花的吸管尖端，放在4～5厘米宽的长纸条的一端，约成45º角，折叠纸条，包住吸管尖部，用左手握住移液管身，右手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。见图3—5。
(三)培养基和玻璃器材的灭菌方法
灭菌的方法，通常可以分为四大类：(1)加热灭菌：包括直接灼烧灭