文档介绍：HYQspinTM 质粒 DNA 小提试剂盒
VER:
试剂盒组成
Cata用后保证Buffer B2瓶盖旋紧
用户自备材料：
◇ mL 离心管
◇ 高速离心机
◇ 无水乙醇
HYQspinTM 质粒 DNA 小提试剂盒 Page 3操作步骤：
大肠杆菌培养和收集
1. 从新鲜的平板上接种单个菌落到 1-5 mL 的含适量抗生素 LB 培养基
中，37℃震荡培养 14-16 小时。
* 不建议过度培养 (>16 小时) ，因为大肠杆菌会降解而且质粒的产量会
降低。
* 不要直接转接甘油冻存的菌。
* 对于在 LB 培养基中培养的大肠杆菌上述操作步骤是最佳的，当使用 TB
or 2xYT 培养基时，一定要确保细菌的密度 OD600 不要超过 。如果
菌液过多，按比例相应的增加 Buffers。
质粒 DNA 纯化
2. 向离心柱中加入500 µL Buffer BS， 12,000 rpm离心30s。
*此步骤为可选步骤，一般情况下，省略此步骤也能得到理想的回收效
果。但当吸附柱存放时间较长时，可能出现吸附能力下降的现象，通过
使用Buffer BS，可以使吸附柱恢复最佳的吸附能力
3. 10,000 rpm 离心 30s，收集菌体，尽可能吸去上清，把管子倒扣在吸
水纸上完全除去残留的培养基。
*残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，DNA 产量低，并可能导致
第 6 步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。
4. 加入 250 µL Buffer B1（确保已加入 RNase A），用移液枪或涡旋震
荡器充分悬浮细菌细胞。
*细菌如果没有充分悬浮均匀，将导致菌体裂解不完全，从而降低产量。
5. 加入 250 µL Buffer B2, 轻轻地反转10 次以混合均匀（不要涡旋），
Page 4 HYQspinTM 质粒 DNA 小提试剂盒然后室温静置2~5min至溶液粘稠而澄清。
*静置时间不超过 5min。
*Buffer B2 在低于室温时会沉淀，如有浑浊现象，使用前请于 50℃左右
水浴加热至沉淀完全溶解，溶液澄清。
6. 加入 350 µL Buffer B3, 温和并充分地混匀，至产生大量白色絮状沉
淀。
*冰上放置 1 分钟有利于提高产量。
*混合液一定要混匀，若混合液仍然是粘稠的球状，再多混合几次直到
出现白色絮状沉淀。
， 12,000 rpm离心10min 。
*若上