文档介绍：单克隆抗体
回顾:什么是细胞融合?有什么优点或作用?
细胞融合(Cell fusion)是指使用人工方法使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。
体细胞杂交:克服有性不亲和性,实现远源遗传重组,在育种方面意义重大。
杂交瘤细胞:具有两亲本特性,生物制药。
基础知识回顾
免疫学基础
1 抗原
进入动物体内对肌体的免疫系统产生刺激作用的外源物质。
包括:蛋白质、多糖、核酸、病毒、细菌、各种细胞等。
特点:外源性、结构性(分子具有表面稳定的环状结构基团作为识别位点)、特异性(抗原与抗体的反应)。
2 抗体P238
动物免疫系统分泌的中和或消除抗原物质的影响的物质,存在于血清中,本质是免疫球蛋白(Immuniiglobbulin,Ig)。
plementarity determining region,CDR) VH 和VL的三个高变区共同组成Ig的抗原结合部位(Antigen-binding site)。该部位形成一个与抗原决定簇互补的表面,决定抗体的多样性与特异性。
多克隆抗体与单克隆抗体
动物脾脏有上百万个B淋巴细胞,一个细胞就是一个克隆,它针对抗原上的一个抗原决定族产生的抗体是单克隆抗体。
一种抗原通常具有多个不同的抗原决定族, 因此能刺激多个B淋巴细胞产生相应的单克隆抗体,因此血清中的抗体是针对不同抗原决定族的单克隆抗体混合物,称为多克隆抗体。
单克隆抗体和多克隆抗体的比较(见下页)
比较项目
多克隆抗体(PcAb)
单克隆抗体(MAb)
免疫原要求
免疫原纯度高,抗体纯度才能高
不纯的免疫原可以获得高纯度抗体
抗体产生细胞
多克隆性
单克隆性
均质性
高度异质
高度纯质
特异性
较高,与抗原上多种决定簇结合
高,与抗原上特定决定簇结合
稳定性
较好
相对较差,对理化条件敏感
标准化
较难,不同批次的抗体质量差异大
易于标准化,批次间差异小
交叉反应
很常见,难避免非特异性反应
不常见,可避免非特异反应
沉淀反应
有
多数没有
实用的血清学试验
大多数血清学试验
一种或多种,需适当选择
供应量
有限
无限
有效抗体含量
- mg/ml
-30 mg/ml
无效Ig含量
- mg/ml
体外培养一般没有,- mg/ml
其它血清蛋白
存在
体外培养可能有少量小牛血清蛋白,小鼠腹水有少量杂蛋白
3. 干扰素
脊椎动物受多种因素(如微生物)诱导产生的一组抗病毒蛋白质。可影响细胞的运动和免疫过程,也可干扰多种病毒的复制而得此名。
分子量数百至数千不等。
工程菌表达为主。
问题的引出
血液得到的只能是混合抗体,但是需要大量的仅针对某一个抗原决定族的单克隆抗体,几乎是不可能的,因此必须采用其他方法。
如果我们能分离得到只分泌某一种特异性抗体的 B淋巴细胞,不就可以大量生产相关单抗了吗?
问题:可以实现吗?有什么技术限制吗?
很难离体培养B淋巴细胞。
(一)历史发现
1975年,英国剑桥大学分子生物学研究室将已适应于体外培养的小鼠骨髓瘤细胞与经绵羊红细胞免疫过的小鼠的脾细胞(B淋巴细胞)进行融合,发现融合形成的杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征:既像骨髓瘤细胞一样在体外培养中能够无限地快速增殖,又能持续地分泌特异性抗体。
病毒诱导制备转化脾细胞
有人直接取出健康的活化脾细胞,在培养中加入病毒体外诱导,以获得能永久生长的特异脾细胞系。
这种方法工作量大、难度高,在制备人用单抗时比较有用。