文档介绍：实验十七 谷丙转氨酶活性测定 Activity Determination of Glutamic Pyruvic Transaminase
一、实验原理
氨基移换酶也称转氨酶,为广泛存在于生物机体内的酶，其作用实验十七 谷丙转氨酶活性测定 Activity Determination of Glutamic Pyruvic Transaminase
一、实验原理
氨基移换酶也称转氨酶,为广泛存在于生物机体内的酶，其作用为催化α-氨基酸的α- 氨基与α- 酮酸的α- 酮基互换。因此在氨基酸的合成和分解，尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。转氨酶的种类甚多。 任何一种氨基酸进行转氨作用时，都由其专一的转氨酶催化，。
在各种转氨酶中，谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）及谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）活力最强。
上述两种转氨酶均广泛存在于机体组织内，在正常人血清中也有少量，机体发生肝炎。心肌梗塞等病变时，血清中转氨酶活力显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。它们的催化反应如下：
COOH COOH COOH COOH
CHNH2+ C=O C=O + CHNH2
CH3 (CH2)2 CH3 (CH2)2
COOH COOH
转氨酶←→
丙氨酸 α-酮戊二酸 丙酮酸 谷氨酸
→
测定转氨酶活力的方法很多，如分光光度法，纸上层析法等。在本方法中，谷丙转氨酶作用于丙氨酸和α－酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2,4－ 二硝基苯肼作用生成丙酮酸2,4－ 二硝基苯腙。
本方法中用分光光度法，根据硝基苯腙的生成量可以计算酶的活力。
二、实验用品
1、材料
新鲜动物肝匀浆。
2、试剂
（1）（pH=）
KH2PO4液50ml， ，，混匀即得。
（2）丙酮酸钠标准液（）：
取A·R丙酮酸钠11mg溶解于50ml （宜当日新配）。
2、标准曲线的绘制
取6支试管分别用0、1、2、3、5标号，按下表所列次序添加各试剂。
将试管于37℃水浴中保温，平衡管内外温度,
2，4—二硝基苯肼后再保温20分钟，
NaOH 5毫升，
在室温下静置30分钟后，
以0号管做“空白”用520nm进行比色，读出光吸收值，以丙酮酸的微摩数为横坐标，光吸收值为纵坐标，画出标准曲线。
管号
试 剂
0
1
2
3
4
5
丙酮酸钠标准液/ml
谷丙转氨酶底物/ml
磷酸缓冲溶液
( ) /ml
37℃水浴中保温，
平衡管
内外温
度
2，4-二硝基苯肼/ ml
保温20
分钟
NaOH ()/ml
5
5
5
5
5
5
静置30
分钟
A520nm
1 测定管
2 “空白”对照管
谷丙转氨酶底物/ml
37℃水浴保温10min，使管内外温度平衡
稀释肝匀浆/ml
37℃水浴保温30分钟
2,4—二硝基苯肼试剂/ml
稀释肝匀浆/ml
保温20分钟，冷却
NaOH () /ml
室温下静置30分钟
A520nm
2、谷丙转氨酶酶活力的测定
四、实验结果
用光吸收值读数在操作曲线上查出转氨酶活力单位数，计算
每100毫升稀释肝匀浆中转氨酶的活力单位数
五、思考题