文档介绍：实训三水产动物病原菌的分离
一、实验目的 :
熟悉水产细菌性病原的分离、培养、纯化与鉴定的基本方法。
二、实验器材 :
牛肉膏蛋白胨琼脂平板、牛肉膏蛋白胨琼脂斜面、接种环、解剖
实训三水产动物病原菌的分离
一、实验目的 :
熟悉水产细菌性病原的分离、培养、纯化与鉴定的基本方法。
二、实验器材 :
牛肉膏蛋白胨琼脂平板、牛肉膏蛋白胨琼脂斜面、接种环、解剖刀、剪刀、镊子、滴管、纱布、白瓷盘、酒精棉球、灭菌试管、酒精灯、记号笔、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅。
患细菌性疾病的水产动物。
三、实验步骤 :
分离病原菌的材料要求是具有典型患病症状的活的或刚死不久的患病水产动
物 , 病原菌的分离方法如下 : 1、接种分离
体表分离 : 先将病灶部位表面用 70% 酒精酒精棉球擦拭消毒或取病灶部分小
片或用经酒精灯灼烧的解剖刀烫烧消毒 , 再用接种环刮取病灶深部组织或直接挑取部分深部患病组织 , 直接在普通琼脂平板上划线分离。
内部组织器官 : 用 70%酒精浸过的纱布覆盖体表或用酒精棉球擦拭 , 进行体表消毒 , 无菌打开病鱼的腹腔 , 以肝、肠、心脏等脏器为材料 , 先将拟分离病原的部位表面用 70%酒精棉球擦拭或用经火焰上灼烧后的解剖刀烫烧 , 以杀死表面的杂菌 , 随即在烧灼部位刺一小孔 , 用灭菌的接种环 ( 待冷 2 ~ 5 秒) 伸向烧灼部小洞中 , 用手指将接种环轻轻旋转两次 , 借以达到取足材料的目的。
鳃部 : 用无菌接种环刮取鳃上的分泌物划平板。
血液及体液 : 用无菌注射器吸取病鱼血液和体液 , 滴于平板涂布 ; 或用灭菌后的接种环挑取血液和体液后于平板上划线 , 分离细菌。
划线分离的方法 : 左手持握普通琼脂平板 , 并靠近火焰 , 右手持取材后的接种环
在琼脂平板上分区划线接种。划线时接种环面与平板表面成 30 ~40 度的角轻轻接
触 , 在平板表面轻快地移动 , 接种环不应嵌入培养基内 , 且不要重复 , 否则形成菌苔。划线完毕 , 盖上皿盖 , 接种环灭菌后放下 , 并在平皿底部用记号笔注明接种材料、日期及操作者代号。
也可对实质性脏器用无菌剪刀下一小块 , 用镊子夹住病料使其剖面接触洁净的玻片 , 作多个触片 , 染色后在显微镜下直接镜检 , 能快速获得结果。
2、培养和观察
接种后的平板经 30 ℃左右培养 24 ~72h 后, 检查菌落生长情况 , 对菌落检查
的主要内容包括 :
( 1 ) 大小 : 其大小以 mm表示 , 微小菌落 : 针尖大 , 直径小于 0 . 5mm , 如支原
体菌落、猪丹毒杆菌菌落 ; 小菌落 : 直径在 0 . 5 ~ 1 mm 之间 , 如嗜血杆菌、布氏
杆菌菌落 ; 中等大小的菌落 : 直径在 1 ~ 3 mm 之间 , 如巴氏杆菌、沙门氏杆菌菌落 ;
大的菌落 : 直径大于 3mm ,如炭疽芽孢