文档介绍：第十章遗传重组要详解演示文稿
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优选第十章遗传重组要
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遗传重组的证明
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Holliday连接体形成以后，就会产生异构化然后拆分。
单链侵入模型中，异源双链首先只在两个DNA分子中的一个形成。Holliday中间体形成以后通过支链迁移能够在另一个DNA分子上产生异源双链，这样就解释了异源双链是如何形成的。
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双链断裂修复模型
目前证明通过两个DNA分子之中的一个双链断裂引发重组是个常见的机制。
该模型认为参与重组的两个DNA分子之一的两条链被核酸内切酶切断，然后在核酸外切酶作用下产生3’单链黏性末端。
两个3’游离末端之一侵入到另一个双螺旋的同源区，置换“供体”双螺旋的一个单链而形成一段异源双链DNA，并同时产生一个D环（D-loop）。
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D环在DNA聚合酶的作用下修补而扩展，直至D环的长度与“受体”DNA双螺旋缺口长度相当，互补的两条单链退火。此时在缺口的两侧各有一段异源双链DNA，两个杂合双螺旋之间为断裂的缺口，并且此缺口为供体DNA序列所填充。
缺口处双链的完整性可以被以缺口3’端为起始的修补合成来修复。缺口是被两次单链DNA的合成而修复的。
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第三节大肠杆菌重组的分子基础
在分子水平上，重组事件发生的先后顺序是相似的：从一个已断裂的分子中产生的单链与其对应的双螺旋发生作用，配对区间扩展，重组中间体形成直到核酸内切酶解离此两个双螺旋分子。
识别反应是重组机制的不可分割的重要部分，并且只涉及到DNA分子的特定区域而不是整个完整的染色体。
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一、 chi位点和RecBCD核酸酶
在λ噬菌体的一些突变种内，存在一些称为chi的位点。chi位点单一的碱基对的改变即可激发重组的发生。这些位点皆含有一个恒定的非对称的8bp序列：
5’ GCTGGTGC 3’
3’ CGACCACC 5’
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Chi位点是一个由基因recBCD编码的Rec BCD酶作用的靶部位。
RecBCD酶是一种多功能酶，具有几种不同的活性。它是一个强有力的降解DNA的核酸酶，早期被检定为活性核酸外切酶V，具有解旋酶的活性。
RecBCD 所介导的解旋和切割可以被用来产生末端，并引发异源双链的形成。
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二、RecA和Holliday连接体的形成
RecA具有两种相当不同的活性:
RecA可以促进单链DNA 与其在双链DNA 分子中互补的DNA 链的碱基相配对。
RecA还可以在SOS 反应中激活蛋白酶。 RecA 需要单链DNA和 ATP才能激活蛋白酶。
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RecA能够利用由RecBCD在Chi位点附近切割所释放的单链3’末端。
，这一反应被称为单链摄取(single-strand uptake)或单链同化(single-strand assimilation)。
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三、Ruv蛋白和 Holliday连接体的拆分
大肠杆菌有一组由三个基因编码与随后的重组相关联的蛋白。
ruvA 和 ruvB 基因的产物促进异源双链的形成。Ruv A 蛋白可以识别Holliday连接体的结构，Ruv B是一个腺苷三磷酸酶并可能提供支链迁移的动力。
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Ruv A在交叉点处与DNA所有的4条链相结合，在交叉点的上游，两个Ruv B六聚体环状结构分别与每个双螺旋相结合。
RuvAB蛋白复合体可以使支链以10～20 bp的速度迁移。
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第三个基因ruv C编码一种能够特异性地识别Holliday连接体的核酸内切酶，此酶可以在体外切断此种交叉而拆分重组中间