文档介绍：酶联免疫吸附测定( Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA ) 免疫学教研室. Company pany Logo 用示踪物质标记抗体或抗原,使其与相应的抗原或抗体反应,使微量的、不可见的反应成为可见的或可测定的。免疫荧光技术用 FITC- 抗 IgM 单抗计数 B细胞免疫荧光技术. Company pany Logo 课程内容? ELISA 的原理? ELISA 的分类?间接 ELISA 的具体操作? ELISA 在医学中的应用实例. Company pany Logo ELISA 的原理 2. 抗原或抗体的固相化 3. 抗原或抗体的酶标记 E . Company pany Logo 间接 ELISA 实验目的: 测小鼠 IgG 免疫兔血清中抗小鼠 IgG 抗体的效价实验材料: 包被抗原:小鼠血清待检抗体/一抗:兔抗小鼠 IgG 酶标抗体/二抗: HRP- 驴抗兔 IgG 聚苯乙烯酶标板水浴箱移液器枪头包被液: 的碳酸盐缓冲液封闭液/封:5% 脱脂奶粉(ALB) 稀释液/稀: 的 PBS (磷酸盐缓冲液) 洗液: PBST ( PBS+% 吐温 20) 显色液: OPD (邻苯二***) 终止液/终:2M 硫酸鼠 IgG( 抗原)兔抗小鼠 IgG( 一抗) HRP- 驴抗兔 IgG( 二抗) 免疫 Fc段. Company pany Logo 操作步骤包被: 1:5000 稀释的正常小鼠血清, 4℃过夜→→→洗涤: 3次, 1min/ 次加酶标抗体: 1:5000 稀释的 HRP 标记的驴抗兔 IgG 抗血清, 37 ℃2 0min 洗涤: 3次, 1min/ 次封闭: 5% 脱脂奶粉, 37 ℃ 20min 加待检抗体: 倍比稀释的兔抗鼠 IgG 抗血清, 37 ℃ 30min 加底物液显色→洗涤: 3次, 1min/ 次→终止液终止显色空白对照无显色待测样品显色明显 EEEE 底物液每孔加100 ul! . Company pany Logo 倍比稀释法与加样 AB 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 稀释液顺序(每孔 100ul) S 稀释液一抗试管 S1 一抗原液. Company pany Logo AB1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 稀释液 2-12 号每孔1 00uL 稀释液,1号孔加入 100uL 一抗, 再加 100uL 一抗到2号孔中,混匀,从2号孔吸取 100uL 加到3号孔中,混匀,.....11号孔吸取100 uL ,丢弃!