文档介绍：中肋骨条藻的酶联免疫反应检测方法
中肋骨条藻的酶联免疫反应检测方法
本发明公开了一种中肋骨条藻的酶联免疫反应检测方法，其中，该方法包括步骤：（a）通过反复在显微镜下挑取单个藻细胞获得纯培养物：(b)酶标板的准备：(c)试验试剂的配置和稀)的检测是通过抗中肋骨条藻多克隆抗体的二抗，其中二抗与标记物偶
联。优选标记物选自放射性同位素、生物素、酶、荧光素或化学发光物质。更优选的酶是辣根过氧化物酶。
[0012]在该方面的还有一个优选实施方式中，固相载体是酶标板。
[0013]在本发明的第二个方面，公开了一种试剂盒，含有:
[0014](a)固定有抗中肋骨条藻的单克隆抗体的固相载体；
[0015](b)抗中肋骨条藻PCNA蛋白的多克隆抗体；
[0016](c)偶联有标记物的二抗，针对抗中肋骨条藻多克隆抗体。
[0017]在本发明的第三个方面，公开了上述试剂盒的用途，用于检测中肋骨条藻细胞。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1显示了实施例3中用已知浓度的系列稀释的中肋骨条藻定标绘制的标准曲线。
【具体实施方式】
[0019]本发明的目的是提供中肋骨条藻免疫学检测的方法，它可以客观、准确地对该藻进行检测。具体包括:本发明提供的检测方法，即双抗体夹心ELISA法，以专一性地识别中肋骨条藻的抗体作为基础。
[0020]抗体的产生
[0021]本发明所述的抗体可以经由中肋骨条藻免疫实验动物而获得，这些实验动物是本领域技术人员所熟知的，通常包括(但不局限于)兔、鼠、猪、狗、牛、羊、马等。特异性的抗体可以直接使用，另一方面抗体的特异性可以经由一些常规的手段，如抗体封闭技术等，得到提高，这也是为本领域内技术人员熟知的，另外，抗体本身也可以用放射性同位素、生物素、酶、荧光素或其他化学发光物质进行标记而进行使用。
[0022]本发明所述的抗中肋骨条藻抗体具有较好的种特异性。利用双坑体夹心ELISA测定所述的抗体与其它藻之间的交叉反应率，结果表明它只能识别中肋骨条藻而不识别其它藻，故可用于中肋骨条藻的定性鉴别。
[0023]本发明所述的二抗可以经由直接购买通用的二抗或由一种动物的IgG免疫另一种实验动物而获得，这一技术是本领域技术人员所熟知的。[0024]与二抗偶联的标记物可以是一直接可检测基团，如金属溶胶(如金溶胶)、发色团或荧光团(如花青、酞菁、部花青、三苯基***、马菁)等的结合位点，见应用化学论题，红外吸收发色团、，Plenum Press, New York, NY, 1990,应用化学论题,染料的化学和应用，Waring等，Plenum Press, New York, NY, 1990,和突光探针和研究化学手册，Haugland, Molecular Probes, ,和放射性标记、酶、磁性颗粒，池度诱导剂等的结合位点，或它可已携带这样的可直接检测的基团。
[0025]酶联免疫检测技术
[0026]酶联免疫检测技术具有灵敏度高(可百倍于常规检测技术)、操作简便、步骤可控、高效快速等优点，且能同时分析大量的样本，是一种对目标抗原进行定量分析的有效手段。
[0027]标准曲线的确定
[0028](1)以制备的中肋骨条藻的单抗包被酶标板，用封闭液封闭，孵育后洗板，加入已知数量的中肋骨