文档介绍：实验二、血涂片的制备和血细胞的观察
追求要求
.掌握血涂片的的制备方法
.认识红细胞及各种白细胞的典型形态
基本原理
涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、同的细胞由于其所含化学成分不一样，化学性质各不相同，所以对染料的亲合力也不一样。①细胞中的碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色，因此，该物质又称为嗜酸性物质。如红细胞中的血红蛋白及嗜酸粒细胞中的嗜酸性颗粒等与伊红结合。②细胞中的酸性物质可与碱性染料美蓝结合而染成蓝紫色，该物质又称嗜碱性物质。如淋巴细胞胞质及嗜碱粒细胞的颗粒为酸性物质，与碱性染料美蓝结合。③中性颗粒呈等电状态与伊红美蓝均可结合，染淡紫红色为中性物质。另外细胞核蛋白主要由脱氧核糖核酸和强碱性的组蛋白等组成，与酸性伊红结合染成红色，但因核蛋白中还含有少量的弱酸性物质，与碱性美蓝作用染成蓝色，因含量太少，蓝色反应极弱，故也被染成紫红色。④原始红细胞和早幼红细胞的胞质含有较多的酸性物质，与美蓝亲合力强，故染成较浓厚的蓝色。随着细胞的发育，晚幼红细胞阶段既含有酸性物质，又含有碱性物质（），既能与碱性染料美蓝结合，又能与酸性染料伊红结合，故染成红蓝色或灰红色。当红细胞完全成熟，酸性物质彻底消失后，只与伊红结合，则染成粉红色。图－瑞特染色原理示意图
（）对细胞染色的影响细胞着色对氢离子浓度十分敏感。细胞各种成分均由蛋白质构成，由于蛋白质是***电解质，所带电荷的正负数量随溶液值而定。对某一蛋白质而言，如果环境的小于其等电点（），则该蛋白质带正电荷即在酸性环境中正电荷增多，易与酸性伊红结合，染色偏红。相反，当环境的大于即在碱性环境中负电荷增多，则易与美蓝结合染色偏蓝。因此，要使用清洁中性的载玻片、优质的甲醇做溶剂和用缓冲液.〜.）来调节染色时的值，达到满意的染色效果。
（）染色效果分析正常情况：血膜外观呈淡粉红色或琥珀色。显微镜下，成熟红细胞呈粉红色。白细胞胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。染色偏酸：红细胞和嗜酸粒细胞颗粒偏红，白细胞核呈淡蓝色或不着色。染色偏碱：所有细胞呈灰蓝色，颗粒深暗。嗜酸粒细胞可染成暗褐色，甚至紫黑色或蓝色。中性颗粒偏粗，染成紫黑色。
（三）血涂片染色的质量控制．载玻片必须非常洁净，中性，无油脂。不清洁或非中性的载玻片会造成细胞特别是红细胞形态发生改变，导致假性的异常形态红细胞出现。非中性的载玻片还会影响染色环境的值，带油脂的载玻片会使细胞分布不均匀。
．良好血涂片的“标准”。血膜由厚到薄逐渐过度，血膜的体尾交界部位红细胞分布均匀，既不重叠又互相紧靠相连。
.抗凝血液制备血涂片。由于能阻止血小板聚集，如需在显微镜下观察血小板形态时可采用，但抗凝血有时能引起红细胞皱缩和白细胞聚集，所以应根据情况恰当选择。
.白细胞较低和需浓缩白细胞的标本处理。为获得较多白细胞，可将抗凝血适当离心，使密度相同细胞集中并分层，然后取红细胞层上薄的灰白色层（有核细胞和血小板较集中）涂片、染色。该方法非常适合于白细胞减低患者的白细胞分类计数及红斑狼疮细胞检查。
.血细胞比容与涂片关系。血细胞比容高于正常时，红细胞较多，血液粘度较高，用较小的角度涂片，可获得满意的血膜。相反，血细胞比容低于正常时，血液粘度较低，需用较