文档介绍：基因工程综合实验报告
A型产气荚膜梭菌a***基因克隆及表达
班级生物工程081班
姓名
学号08771029
扌旨导教师高凤山
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成绩
一、实验原理
Hindm
，每管800吐LB（共10个）。在时间允许的情况下，将高压后的LB试管加入卡那，。
总结：需要灭菌的东西-液体培养基（试管、30mL三角瓶及剩余液体LB的三角瓶）-固体培养基、离心管（至少30个）、各种规格的枪头。
3）接菌
下午，接种BL21感受态于1管5mL培养基中，37C震荡培养。
（二）感受态细胞制备、转化、重组菌接种
1）感受态细胞的制备
从大肠杆菌DE3平板上挑取一个单菌落接种于5mLLB液体培养基的试管
中，37°C振荡培养过夜。
，37C振荡培养2小时。测定菌体的OD600，，取出。
将菌液转移到2mL离心管中，冰上放置10min。
离心10min（4000r/min），回收细胞。
倒出培养液，将管倒置1min以便培养液流尽。
，立即放在冰上保温30min。
0-4C4000r/min,离心10min,回收细胞。
用冰冷的含有50%，（务必放在冰上）。然后-80C保存于冰箱。
2）转化步骤
取1吐质粒，加入到200吐的感受态细胞中，混匀，冰上放置30min
将管放到42C热激90sec
结束后冰浴2min
每管加800yL的LB液体培养基，37C培养1h（慢摇）
将适当体积（100yL）已转化的感受态细胞涂在含有氨苄素（30ug/mL）的培养基上
倒置平皿37C培养12-16h，出现菌落
3）接种重组菌接种一管，加5L即可。
（三）提取质粒、制备琼脂糖凝胶、电泳
1）提取质粒步骤
将5mLLB液体培养基加入到试管中，，接种环取菌
（a***），37C振荡培养过夜。
取1mL培养物倒入微量离心管中，6000r/min离心2min。
吸去培养液，使细胞沉淀尽可能干燥。
将细菌沉淀悬浮于100吐SolutionI中，充分混匀，冰上放置10min。
加入200yLSolutionH，盖紧管口，颠倒数次（10-20次）使混匀。冰上放置2min
。
加入150吐溶液111（冰上预冷），盖紧管口，温和颠倒数次，使混匀。冰上放置
2min。12000r/min,离心5min,将上清转至另一试管中。
向上清中加入等体积酚：***仿（1：1）（去蛋白），反复混匀，12000r/min,离心5min,将上清转移到另一离心管中。
向上清加入2倍体积的无水乙醇,混匀后,室温放置10min,12000r/min离心5min,倒去液体，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。
用1mL70%乙醇洗涤质粒DNA沉淀,振荡并离心,倒去上清液,真空抽干或空气中干燥。
加入20吐TE缓冲液，其中含有20ug/mL的RNA酶，37°C水浴1h,然后-20°C保存备用。
2）琼脂糖凝胶制备
稀释50xTAE为1xTAE，