文档介绍：Folin-酚法测定蛋白质含量
一、目的
掌握 Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法，熟悉分光光度计的操作。
二、原理
Folin-酚试剂法包括两步反应：第一步是在碱 2 4 2
50mL 85 ％磷酸和 100mL 浓盐酸充分混匀，接上回流冷凝管，以小火回流 10h。回流结
束后，加入 150g 硫酸锂和 50mL 蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾 15min，驱除过量
的溴，冷却后溶液呈黄色（倘若仍呈绿色，再滴加数滴液体溴，继续沸腾 15min）。然后稀
释至 1L，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存，使用前大约加水 1 倍，使最终浓度相当于
1mol/L。
四、操作步骤
1．标准曲线的制作
（1）配制标准牛血清白蛋白溶液：在分析天平上精确称取结晶牛血清白蛋白，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解后转入 100mL 容量瓶中，烧杯内的残液用少量蒸馏水冲洗
数次，冲洗液一并倒入容量瓶中，用蒸馏水定容至 100mL，则配成 250μg/mL 的牛血清白
蛋白溶液。
（2）系列标准牛血清白蛋白溶液的配制：取 6 支普通试管，按表 1 加入标准浓度的牛血
清白蛋白溶液和蒸馏水，配成一系列不同浓度的牛血清白蛋白溶液。然后各加试剂甲 5mL，
混合后在室温下放置 10min，再各加试剂乙，立即混合均匀（这一步速度要快，否则
会使显色程度减弱）。30min 后，以不含蛋白质的 1 号试管为对照，用 722 型分光光度计
于 650nm 波长下测定各试管中溶液的光密度并记录结果。

（1）标准曲线的绘制：以牛血清白蛋白含量（μg）为横坐标，以光密度为纵坐标绘制标准
曲线。
2．样品的提取及测定
（1）准确称取绿豆下芽胚轴 1g，放入研钵中，加蒸馏水 2mL，研磨匀浆。将匀浆转入离
心管，并用 6mL 蒸馏水分次将研钵中的残渣洗入离心管，离心 4 000r/min、20min。将上
清液转入 50mL 容量瓶中，用蒸馏水定容到刻度，作为待测液备用。
（2）取普通试管 2 支，各加入待测溶液 1mL，分别加入试剂甲 5mL，混匀后放置 10min，
再各加试剂乙，迅速混匀，室温放置 30min，于 650nm 波长下测定光密度，并记录
结果。
五、结果计