文档介绍：一种硫酸盐还原菌快速检测方法及其试剂盒的制作方法
一种硫酸盐还原菌快速检测方法及其试剂盒的制作方法
本发明涉及油田水样检测处理【技术领域】，特别涉及一种硫酸盐还原菌快速检测方法及检测用试剂盒，本发明的方法首先将待测水样预处理除杂，然后向)中体积相除可以确定原待测液中APS的含量。 [0006]为进一步提高检测的准确度和灵敏性,如果步骤(5)中测得的待测
水样的硫酸盐还原菌数量小于100个/ml,则取20-50倍大体积的水样重复步骤(1)_ (6)进行检测。本步骤中，通过浓缩过滤更大体积的水样可以进一步精确测定水样中的APS浓度，提高检测的灵敏性。
[0007]为准确测定不同浓度范围内的APS含量并提供对比参考,所述步骤(3)已知含量的硫酸盐还原菌溶液的含量分别取100个/ml、1000个/ml、10000个/ml、100000个/ml和1000000 个 /ml。
[0008]为便于检测结果的比对，所述步骤(5)中的颜色对比法指将各已知含量的硫酸盐还原菌溶液显色反应后反应液的颜色制成标准比色卡,然后将待测液显色反应后的颜色与所述标准比色卡比对，以确定待测水样中硫酸盐还原菌含量。
[0009]为便于检测结果的比对，所述步骤(5)中的OD值检测对比法是指将各已知含量的硫酸盐还原菌溶液显色反应后反应液的颜色用化学发光仪分别检测其0D420值，再用硫酸盐还原菌溶液含量和0D420值分别作纵作标和横作标制成SRB含量快速检测标准曲线,然后将待测液显色反应后的颜色用化学发光仪检测其0D420值,再通过所述SRB含量快速检测标准曲线确定待测水样中硫酸盐还原菌的含量。
[0010]为进一步实现本发明，所述步骤(1)中预处理方法为取待测水样10—30ml,用200目的筛网过滤水样中的固体微粒杂质,用无菌超纯水洗涤筛网及网上测的杂质微粒1-2次,并将过滤后的水样和清洗滤网后的无菌水一同收集后分装到若干个离心管中，以2500-3000 rpm进行离心分离,弃去上清液，收集沉淀的菌体，分别用少量无菌超纯水悬浮，并用漩涡振荡器混均，，离心收集沉淀的菌体,用无菌超纯水洗涤并离心收集沉淀2至3次以去除水样中可溶性杂质。
为进一步提高检测精度，所述步骤(3)中的反应底物及各反应液的温度为25 V —35 °C ,反应底物的PH值为7。
[0011]为进一步实现本发明的快速检测的目的，以方便在施工现场取样检测,本发明根据上述方法还提供一种硫酸盐还原菌快速检测试剂盒，包括:
A)200目筛网…一只；
B)细菌裂解液A和B各一瓶,每瓶25ml，所述A中包括30mmol/1 Tris-HCl, 2 mmol/1EDTA, 100 mmol/1 NaCl),所述 B 中包括 % Triton X-100，50 μ g/ml 溶菌酶, I/ml苯***磺酰***；
O阳性对照液和阴性对照液各I瓶，每瓶25 ml, IU APS还原酶溶液，所述阴性对照液为MES缓冲液；
D)反应底物I瓶25m!, inmo!/L K3Fe (CK)6, mmol/L腺苷-5,-磷酸、 mmol/L mmol/L EDTAU00