文档介绍：PCR实验报告
PCR实验报告
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P
C
R
实
R 反响中采用的一对引物， 是依据与扩增地区两头序列相互互补的原
则设计的，所以每一条重生链的合成都是从引物的退火联合位点开始并朝反方向
延长的，每一条新合成的 DNA 链上都有新的引物联合位点。
（5） 整个 PCR 的反响全过程，即 DNA 解链（变性）、引物与模板 DNA 联合（退火）、
DNA 合成（链的延长）三步能够被不停重复。经多次循环以后，反响混淆物中所
含有的双链 DNA 分子数，即两条引物联合位点之间的 DNA 区段的拷贝数， 理论
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上的最高值应当是 2^n，能进一步知足遗传剖析的需要。
试剂作用：
（1） 引物： DNA 复制的开端点，针对复制 DNA 片段的两头，有 5’引物和 3’引物
（2） Taq DNA 聚合酶：促使 dNTPs 与模板联合。
（3） Buffer：Tris-HCl 反响缓冲液， Taq DNA 聚合酶供给一个最适酶催反响条件。
（4） Mg2+ ：对 PCR 扩增效率影响很大，浓度过高可降低 PCR扩增的特异性，浓度
过低则影响 PCR 扩增产量甚至使 PCR 扩增失败而不出扩增条带。
（5） dNTPs：底物，在引物指引下合成与模板互补的 DNA 新链。
（6） 白腊油：防备 PCR加热过程中 DNA 蒸发。
试剂配置体积：
20μ l 系统中各试剂配置以下表：
试剂 H2O Buffer Mg2+ dNTPs P（引物） T（模板） E（酶）
体积 / μl 9 2 2 4 2 1
温度和时间：
（1） 热启动： 94℃， 5~10min
（2） 变性： 94℃， 45~60s。
（3） 退火： 50~65℃， 1min。退火温度计算： Tm- （5℃~10℃），Tm（解链温度） =4
G+C） +2（ A+T ）。
（4） 延长： 72℃， 1~ 。
（5） 步骤（ 2）~ （ 4）热循环 25~30 个周期
（6） 保温：延长 72℃， 10min
产物检测：凝胶电泳。
实验步骤：
（ 1）设计 20μ l 系统各试剂配比：
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试剂 H2O Buffer Mg2+ dNTPs P（引物） T（模板） E （酶）
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体积 / μl
9
2
2
4
2
1
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