文档介绍：中国生物工程杂志 China B iotechnology, 2010, 30( 3): 56260
富集宏基因组 DNA中 A淀 A淀粉酶是一种重要的工业酶, 被广泛应用于食品、 2g, MgSO4 0. 6g)
纺织、洗涤剂及生物能源等行业。 Sajedi等 [324] 发现了一 LB培养基 (每升含蛋白胨 10g, 酵母粉 5g, NaCl 10g,
种耐酸性能优越且不依赖于钙离子的 A淀粉酶 KRA, 并 调 pH 至 7. 0)培养基氨苄青霉素终浓度为 100Lg/m l。
克隆到编码该酶基因的部分序列 ( AY841124)。利用反 1. 2 方 法
向 PCR 与巢式 PCR 结合的方法从环境宏基因组 DNA中 1. 2. 1 芽孢杆菌的富集 称取 5g土样重悬于富集培
克隆与其有较高同源性的淀粉酶全长基因。 养基 ( 100m l)中, 沸水浴 15m in, 37e 、220r/m in摇床培
养 24h。
1 材料与方法 1. 2. 2 宏基因组 DNA的粗提与纯化 参见文献 [ 2]。
1. 2. 3 耐酸 A淀 粉酶全 基因的克 隆 根据 GenBank
1. 1 材 料
中登陆号为 AY841124的 A淀粉酶部分序 列设计引物
1. 1. 1 菌株和质粒 克隆载体 pMD182T购自 TaKaRa
P1: 5c2GAGATGCGGGGCATTTATCTGAAAT23c, P2: 5c2
收稿日期: 2009212223 修回日期: 2010201219
TCTCGCCGGCATTTGCTTTCCGACG23c以宏基因组 DNA
* 国家科技支撑 计划课 题 ( 2007BAD75B05 )、国际 科技 合作 项目
( 2008DFA30710 )资助项目