文档介绍：抗肿瘤药物实验法
安徽医科大学临床药理研究所
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在抗肿瘤研究中，人们提出了肿瘤多步骤、DNA突变、细胞凋亡、细胞周期贴壁法及半固体培养基法。
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【操作步骤】
（1）贴壁集落形成：适用于几乎所有贴壁生长的细胞。
1）生长期贴壁细胞一瓶，胰蛋白酶消化成单细胞悬液，活细胞计数，培养基稀释成50～100个细胞/ml。
2）取直径33～35mm培养皿（或15ml培养瓶）或6孔板，每组3复孔/皿，受试药20μl，稀释后细胞悬液2ml，摇匀，5%CO2、37℃培养箱培养7～14天。
3）弃上清，PBS洗2次，2ml/次，无水甲醇固定5min，静置干燥，用吉姆萨染色或1%结晶紫染色5～10min后，用自来水冲洗，室温干燥，镜下计数75μm以上的集落。
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（2）软琼脂集落形成：适用悬浮和贴壁生长细胞。
1）计数对数生长期细胞，15% NBS培养液配成1000个/ml细胞悬液，37℃温育。
2）取33～35mm培养皿，3复皿，加受试药20μl。
3）取37℃新鲜培养液9份，加沸水浴中融化的5%琼脂液1份，摇匀，加入平皿，每个1ml，混匀置室温使琼脂凝固。
4）%，加入已铺底层琼脂的平皿中，每个1ml，置室温使琼脂凝固。
5）将平皿置5%CO2，37℃孵育箱中培养7～10天。
6）镜下计数直径大于75μm（50个细胞以上）的集落。
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【结果评定】
（1）剂量反应曲线：以集落抑制百分率与剂量对数作图，可以得到一条S形曲线并求出药物的半数抑制浓度（IC50）。
（2）亦可计算各加药组集落形成率。
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5、癌细胞分化诱导实验
【基本原理】癌症属于细胞分化异常的疾病。恶性肿瘤存在着明显的细胞分化受阻。白血病、黑色素瘤、肝癌、结肠癌、神经母细胞瘤等可在体外被某些化合物诱导分化为正常细胞或近似正常的细胞。这些发现为抗肿瘤药物研究开辟了一条新的途径。因此，癌的分化治疗已成为癌症研究的重要前沿方向之一。
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分化指标包括形态学变化、及生化功能变化 。
人早幼粒细胞白血病HL-60细胞的分化诱导实验
HL-60细胞分化为成熟度不同的粒细胞或巨噬细胞
硝基四氮唑蓝（NBT）试验:NBT还原能力应大于50％。
形态学变化的观察:成熟粒细胞所占比例越高，说明分化效果越好。
吞噬功能测定:分化诱导剂的吞噬百分率应在50％以上。
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肝癌Bel 7402细胞分化诱导实验
【基本原理】肝癌Bel 7402细胞甲胎蛋白（AFP）在肝癌中分泌量很高。γ-GT（半乳糖转移酶）在癌症发生发展过程中活性逐渐上升。白蛋白（ALB）及TAT（酪氨酸转氨酶）在分化良好细胞下降。在体外测定这些蛋白的含量及活性，用以判断肝癌细胞的分化程度。
AFP及ALB测定 ：AFP、ALB放免测定试剂盒说明测定AFP及ALB含量
γ-GT 、TAT测定：紫外可见分光光度法。
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第2节 肿瘤动物模型体内筛选方法
4. 转基因动物肿瘤实验法
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对诱发肿瘤的评价
诱发性肿瘤的病因与由环境因素所诱致人癌情况相似。癌细胞增殖动力学在两者间亦接近，故动物诱发肿瘤类似人体肿瘤。
但人癌原因十分复杂，诱癌剂不清，肿瘤的病理组织学与动物不同，发生发展与动物诱发肿瘤不完全一致。
诱发肿瘤不仅诱发需时较长，成癌率不高。多数内脏肿瘤不作解剖，难以判断是否已发生肿瘤。发生时间先后、发展速度个体差异大。
加之化学致癌物的来源比较困难，并随着环境保护意识的增强对相关的动物实验室提出了更高的要求和限止，所以本法不宜作一般抗癌药物筛选应用.
对移植性肿瘤有效的药物，可用本法进一步验证其抗癌疗效。
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对自发肿瘤总的评价
其肿瘤发生率与瘤细胞动力学特点与人癌近似，生长较移植肿瘤慢，对药物敏感度不高，疗程较长，故便于进行综合化疗的研究；
理论上用带有自发肿瘤模型筛选药物较理想。然而，动物自发肿瘤的病因取决于的遗传特性，与人癌病因区别较大。
很难在限定期间内得到大量生长均匀的带瘤动物，各动物肿瘤之间生长速度差异也较大，给评价带来困难。
此类肿瘤常用于特殊目的试验或作为“二级筛选”模型。
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对转基因小鼠肿瘤模型的评价
该模型较好地再现了人类肿瘤发生发展的完整变化，包括机体从正常演变为癌前病变进而发展为恶性肿瘤的全过程，该模型也为相关基因与肿瘤的关系在整体水平研究和基因药物的研发提供了良好的手段。
但肿瘤的发生受